[发明专利]基于适体-金纳米-酶复合物的凝血酶电化学传感器检测法

摘要

本发明涉及基于适配体-金纳米粒子-辣根过氧化物酶复合物信号放大的电化学适配体传感器检测凝血酶的方法，属于分析化学技术领域。凝血酶的适配体I固定在金包磁性纳米粒子上作为捕获探针，适配体II用金纳米粒子和辣根过氧化物酶双标记形成[适配体-金纳米粒子-辣根过氧化物酶]复合物作为检测探针。二者与凝血酶结合形成[金包磁性纳米粒子-适配体I]/凝血酶/[适配体II-金纳米粒子-辣根过氧化物酶]三明治结构。将三明治结构固定到电极表面，通过酶的催化反应来检测凝血酶。本方法操作简单，响应快，灵敏度高，特异性强，对于凝血酶的检出限为30fmol·L-1，线性范围为0.1-60pmol·L-1。

主权项

首先参考文献(Lyon，J.L.，Fleming，D.A.，Stone，M.B.，et al.Synthesis of Fe Oxide Core/Au Shell Nanoparticles by Iterative Hydroxylamine Seeding.Nano Letters，2004，4(4)：719‑723)的方法合成金包磁性纳米粒子，然后将凝血酶适配体I捕获探针(此适配体I的序列为5′SH‑(CH2)6‑GGTTGG T GTGGTTGG)固定在金包磁性纳米粒子上。具体做法是：取50μL金包磁性纳米粒子悬浮液，用三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液(pH 7.4，包含100mmol·L‑1氯化钠，5mmol·L‑1氯化钾，1mmol·L‑1氯化镁，5mmol·L‑1氯化钙)洗三次，再重新分散到495μL三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液中超声30min。5μL巯基修饰的适配体I(100μmol·L‑1)加入到其中，室温下温和搅拌2h。磁性分离，再用三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液洗三次，除去未反应的适配体I。然后将固定有适配体I的金包磁性纳米粒子分散到500μL 1mmol·L‑1的6‑巯基己醇中封闭40min，磁性分离用三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液洗三次后得到的纳米粒子分散到500μL三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液中，保存于4℃低温下。