[发明专利]成品烟烟丝总DNA的提取方法有效
| 申请号： | 201110172183.1 | 申请日： | 2011-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN102286461A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 李元实;马林;王春利;朴永革;金哲;崔成哲;于海顺 | 申请（专利权）人： | 吉林烟草工业有限责任公司;郑州轻工业学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 朱建新;逯长明 |
| 地址： | 133000 吉林省延*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种成品烟烟丝总DNA的提取方法，改良了传统的CTAB法提取DNA方法，事先采用70％乙醇水溶液对样品的前处理，加大CTAB沉淀缓冲液体积，解决了成品烟烟丝中DNA提取难度大的难题，为各类卷烟的总DNA提取提供了一套稳定、完整、可行的方法。本发明的提取方法提高了DNA的沉淀效率，降低DNA提取难度。 | ||
| 搜索关键词： | 成品 烟丝 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种成品烟烟丝总DNA的提取方法，包括以下步骤：①、用65％～80％的乙醇水溶液浸泡成品烟烟丝，室温下7～9小时；过滤取滤液，40℃～50℃烘干；②、向步骤①烘干产品中加入2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液，充分混匀，于60℃～70℃保温20～40min；③、步骤②反应产物降温至室温，加入与步骤②提取缓冲液相同体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀后离心，取上清液；④、步骤③上清液中加入用量与步骤②提取缓冲液相同体积的2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液，以及用量与步骤②提取缓冲液相同体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀；离心，取上清液；⑤、向步骤④上清液中加入1～2倍体积的十六烷基三乙基溴化铵沉淀缓冲液，混匀，静置；离心，得沉淀物；⑥、向步骤⑤的沉淀物中加入1.2～1.5mo l/L NaCl溶液，搅拌溶解；离心取上清液；⑦、向步骤⑥得到的上清液中加入2～4倍体积经‑20℃～‑30℃预冷的无水乙醇，混匀，静置；离心，得沉淀物。
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