[发明专利]一种浮游动物及其肠道内含物总基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种浮游动物及其肠道内含物总基因组DNA的提取方法。它是利用中性鲁格氏液固定浮游动物使得肠道内含物不会损失，再利用无菌且经过0.2μm滤膜过滤的海水冲洗其体表去除体表附着的其他生物，避免其对浮游动物及其肠道内含物DNA的污染，再用无菌超纯水清洗降低海水中盐离子对DNA提取造成的影响，经破碎后用DNA裂解液裂解，使得浮游动物及其肠道内含物中的DNA释放游离于裂解液中，然后再经常规方法提取出浮游动物及其肠道内含物的总基因组DNA。本发明实现了对浮游动物及其肠道内含物的总基因组DNA的提取，最大限度的减少浮游动物肠道内含物DNA量的损耗，为准确构建现场浮游食物网的定性结构，进而解析区域生态系统的功能和效率提供了高质量的DNA样品。

主权项

一种浮游动物及其肠道内含物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)将浮游动物用中性鲁格氏液固定，再将同一种类的固定好的浮游动物分在一起，然后将固定好的同一种类的浮游动物用无菌、且经过0.2μm滤膜过滤的海水反复冲洗浮游动物的体表，直至体表无其他生物附着；取出浮游动物，再用无菌超纯水清洗，取出将水吸干，冰冻成块，再研磨破碎；(b)将研磨破碎的浮游动物用DNA裂解液裂解，55℃裂解2～48h，然后用常规方法提取裂解后溶液中的DNA，所得到的DNA即为浮游动物及其肠道内含物总基因组DNA；所述的DNA裂解液为Tris‑HCl 10～50mM，SDS 5～10g/L，EDTA 100mM，蛋白酶K200～500μg/mL，其余为水，pH8.0。