[发明专利]白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法，以黑素细胞基本培养液Hams F12、胎牛血清、人粒细胞集落刺激因子、促黑素生成素、异甲基黄嘌呤、肾上腺素及维生素C混合液、青链双抗霉素配置黑素细胞培养基，用于自体黑素细胞的体外培养，并以卡波姆凝胶与上述黑素细胞培养基构成一种涂布载体系统。本发明通过使用含人粒细胞集落刺激因子G-CSF的黑素细胞培养基，使黑素细胞在体外大量增殖；卡波姆凝胶起到很好的固定作用，从而解决现有的黑素细胞移植过程中细胞悬液易流失的问题，减少黑素细胞的流失量，提高植入率并且不会对黑素细胞造成损伤，降低手术成本，在临床应用中，操作简单安全，为白癜风的治疗提供了新的途径。

主权项

一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配置黑素细胞培养基：取黑素细胞基本培养液Hams F1280～120份，加入胎牛血清FBS 8～12份，人粒细胞集落刺激因子G‑CSF 0.16～0.24份，100ng/ml的促黑素生成素α‑MSH 0.08～0.12份，异甲基黄嘌呤IBMX0.08～0.12份，1.5ug/ml的肾上腺素及维生素C混合液0.8～1.2份，青链双抗霉素0.8～1.2份，在4℃的冰箱中保存；(2)黑素细胞的体外培养：①无菌条件下获得自体皮肤样本，清洗后用0.25％的胰蛋白酶‑EDTA消化液在37℃条件下消化10min～15min；②终止消化，获取细胞悬液，离心，弃上清，收集沉淀黑素细胞，加入上述黑素细胞培养基，置于细胞培养箱以37℃、5％CO2、饱和湿度条件下孵育；每2～3天更换1次上述黑素细胞培养基；③根据黑素细胞生长和增殖情况，进行传代5～6代即可完成体外培养，制成黑素细胞悬液；(3)涂布载体系统的合成：以卡波姆940凝胶为涂布载体，卡波姆940凝胶常规高压灭菌处理，按1∶4～6的体积比加至黑素细胞悬液，并均匀混合至嗜喱状。