[发明专利]一种利用固定化细胞制备L-异亮氨酸的方法

摘要

一种利用固定化细胞制备L-异亮氨酸的方法，该方法包括以下步骤：1）培养基的制备；2）菌种活化；3）菌种扩大培养与菌体细胞的收集；4）菌体细胞固定化；5）L-异亮氨酸的转化；6）L-异亮氨酸的分离纯化。本发明提供的一种利用固定化细胞制备L-异亮氨酸的方法，可以解决微生物发酵法的缺点，简化了工艺过程，提高了底物的利用率，底物L-异亮氨酸转化率高，产品得率高。

主权项

一种利用固定化细胞制备L‑异亮氨酸的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：1)培养基的制备液体种子活化培养基：用葡萄糖5g，NaCl5g，牛肉膏5g和蛋白胨10g，水定容至1000ml，在121℃下灭菌30分钟后制得pH值为6.8～7.2的液体种子活化培养基，摇瓶扩大培养基：用葡萄糖50g，(NH4)2SO4 20g，玉米浆15g，KH2PO4 1g，MgSO40.5g，轻质CaCO3 6g，水定容至1000ml，在121℃下灭菌30分钟后制得pH值为6.8～7.2的摇瓶扩大培养基，发酵转化培养液：用葡萄糖120～150g，(NH4)2SO4 20g，玉米浆15～20g，KH2PO41g，MgSO4 0.5g，轻质CaCO3 6g，水定容至1000ml，在112℃下灭菌30分钟后制得pH值为6.8～7.2的发酵转化培养液；2)菌种活化：将经冻干保藏的黄色短杆菌用5ml无菌生理盐水制成108个/ml～109个/ml的菌悬液后，接入液体种子活化培养基中在30℃～31℃下培养20～24小时后制得活化后的菌种；3)菌种扩大培养与菌体细胞的收集：将步骤2)制得的菌种接种到摇瓶扩大培养基中，摇瓶扩大培养基的装液量为50～100mL/250mL三角瓶，菌种接种量为5％～10％，于30℃～31℃、转速150～200转/分的恒温振荡培养器中振荡培养22～24小时，然后将发酵液离心收集菌体细胞；4)菌体细胞固定化：将步骤3)中收集的菌体细胞按1∶10～1∶5的比例和包埋剂混合均匀，滴入成型剂中固化成型后制得固定化菌体细胞；5)L‑异亮氨酸的转化：将步骤4)中制得的固定化菌体细胞装柱，将发酵转化培养液流经凝胶柱进行生物转化，转化成L‑异亮氨酸，收集流出的转化液；6)L‑异亮氨酸的分离纯化：将步骤5)中收集的转化液用活性炭脱色去除杂质后，减压浓缩至原来体积的30％～40％，于10℃～15℃下静置3～5小时育晶，即制得L‑异亮氨酸结晶粗品。