[发明专利]聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法

摘要

本发明提供一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，本发明的发明人对各种层析方法进行了大量的研究，发现利用脱盐层析、离子交换串联层析和脱盐层析顺序组合纯化，能够获得高纯度的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子。本发明纯化工艺充分利用了目的蛋白在表面电荷和疏水性上的特点，先通过一个阴离子交换层析柱，有效的去除了内毒素，增加了工艺的可控性；第二步层析充分利用目的蛋白的强疏水性，实现了串联层析，将内毒素的去除和蛋白的纯化两个步骤合并为一个步骤。本工艺不仅可以有效去除内毒素，并且简化了操作步骤，节省了生产时间，提高了生产效率，十分适合大规模工业化放大生产。

主权项

一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：将经过脱盐后的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子交联液顺次通过阴离子交换层析柱与多结合型离子交换层析柱串联层析系统，使内毒素结合到阴离子交换层析柱上；之后采用添加了氯化钠的缓冲液单独对多结合型离子交换层析柱进行洗脱，收集洗脱后的目的蛋白液；其中所述的步骤(2)中采用的阴离子交换层析柱的层析介质为琼脂糖凝胶类或聚苯乙烯类，配基为季氨基Q或二乙基氨乙基DEAE；所述的多结合型离子交换层析柱的层析介质为高流速琼脂糖凝胶类或聚苯乙烯类或硅颗粒类，其配基为带部分疏水基团的离子交换配基；所述的添加了氯化钠的缓冲液为Tris‑HCl或醋酸钠缓冲液，缓冲液pH为4.0～7.0，缓冲液浓度为10mmol/L～100mmol/L；其中氯化钠浓度为0.1mol/L～1.0mol/L。