[发明专利]利用巢式PCR结合基因特异引物的反转录技术挖掘低丰度表达基因和系统鉴定剪接变体的方法与应用有效
| 申请号： | 201110195025.8 | 申请日： | 2011-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN102260670A | 公开（公告）日： | 2011-11-30 |
| 发明（设计）人： | 张成岗;张艳春;严瑞芬;屈武斌;吴永红;高艳 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;G06F19/28;C12N15/10;C12Q1/68;C12N15/12 |
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| 地址： | 100850*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用巢式PCR结合基因特异引物(GSP)反转录技术挖掘低丰度表达基因和系统鉴定剪接变体的方法与应用。该方法基于3’GSP1的反转录PCR，利用梯度PCR寻找每个基因每对引物组合的最佳退火温度，基于GSP的巢式PCR测序并基于序列分析判定是否为新的剪接变体。本方法简便易行、重复性好、稳定性高、可靠性强，并且极大地节约了实验成本，可应用于不同生理病理状态下真核生物低丰度表达基因的挖掘和高、低丰度表达基因剪接变体的鉴定及发现中，可用于挖掘低丰度表达基因和鉴定与发现高表达基因及低丰度表达基因的剪接变体，除了靶定基因已知的剪接变体外，更可用于基因未知剪接变体的发现，应用前景广阔。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 pcr 结合 基因 特异 引物 转录 技术 挖掘 低丰度 表达 系统 鉴定 剪接 变体 方法 | ||
【主权项】：
用于挖掘低丰度表达基因和系统鉴定剪接变体的基因特异引物(GSP)，是在待鉴定基因的已知剪接变体的全长cDNA序列范围内寻找可能的候选引物区域，并以DNA杂交探针兼容反转录引物的形式设计出3’GSP，然后将设计好的3’GSP直接用于反转录和巢式PCR反应，用以挖掘低丰度表达基因和系统鉴定基因的可变剪接变体。
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