[发明专利]银鲳精子冷冻保存方法

摘要

本发明涉及一种银鲳精子冷冻保存方法，是选取性成熟的亲鱼采集优质精液，选择适宜基础液及抗冻液，精液与抗冻液按照体积比1∶1混合后，冰上保存4-5min，按照三步降温法降温至-150℃后停留5min，直接投入液氮中保存；解冻时，将冷冻管在液氮蒸汽中停留2min，迅速投入28℃水浴解冻90s后置于室温下完全溶解，将解冻精液用海水激活，精子的快速游动时间平均57.41s，精子活力(快速运动精子占全部精子的百分数)平均为83.62％，极大提高了银鲳的受精率。

主权项

一种银鲳精子冷冻保存方法，其特征在于：保存方法的步骤是：(1)精液采集：选择性腺发育成熟的雄性亲鱼，采用腹部挤压法获取精液，将活动率85％以上的精液用于精子冷冻，精液采集后置于冰上保存；(2)基础液选择：配制方法：NaCl7.5g/L，NaHCO30.25g/L，KCl0.38g/L，CaCl2·2H2O0.18g/L，MgCl20.22g/L，NaH2PO40.22g/L，D‑葡萄糖1g/L，以1N HCl调节pH至7.3，备用；(3)抗冻剂选择：将上述基础液终浓度的10‑15％二甲基亚砜作为抗冻保护剂；(4)精子的稀释与平衡：将精液与抗冻剂按照体积比1∶1混合，在冰上平衡4‑5min；(5)精子冷冻：将平衡后的精液分装入冻存管中，降温冷冻保存；(6)精子解冻：先将冻存管提至罐口，在液氮蒸汽中停留1.5‑2.5min，然后将冷冻管取出迅速置于25‑30℃水浴中解冻80‑100s，取出置于室温下至完全融化；(7)精子激活后的活力检验：室温条件下，以自然海水激活精子，检查精子活力，统计精子快速运动时间。