[发明专利]具有增强的生物学效用的干扰素‑β的聚合物缀合物

摘要

提供了合成细胞因子和其受体结合拮抗剂，特别是非糖基化的干扰素β，的聚合物缀合物的方法，该缀合物保留了非常高的生物学效能。根据本发明方法制备聚合物缀合物消除或避免了受体‑配体相互作用的空间抑制，该空间抑制通常产生于聚合物向细胞因子的受体结合区域及其激动性和拮抗性类似物的附着。本发明也提供了由这些方法生产的缀合物和组合物。本发明也提供了含有此类缀合物和/或组合物的试剂盒，以及这些缀合物和组合物在各种诊断、预防、治疗和生物处理应用中的使用方法，包括治疗多发性硬化。

主权项

一种增加非糖基化干扰素β的体外生物效力的方法，包含在存在十二烷基硫酸钠(SDS)下选择性地偶联一种聚(乙二醇)(PEG)至该干扰素β的氨基末端氨基酸上，以获得经修饰的干扰素β，其中该氨基‑末端氨基酸位于该干扰素β的受体‑结合功能域的远端，其中该PEG具有的分子量为10kDa－30kDa，其中所述增加的体外生物效力是在响应于干扰素β的细胞培养测定法中测量的增加的抗增殖的效力，以及其中所述偶联包括(a)(i)混合所述干扰素β和所述PEG的醛衍生物以形成席夫碱，和(ii)在一定条件下用温和的还原剂，还原所述席夫碱，从而形成仲胺键，其中所述经修饰的干扰素‑β的体外生物效力是所述偶联前所述干扰素‑β的体外生物效力的2.5倍－6倍，并且其中所述选择性偶联得到90％的所述PEG缀合于氨基‑末端氨基酸；或者(b)(i)在对所述干扰素‑β的至少一个必需的甲硫氨酸残基具有最小的氧化反应的条件下，用高碘酸盐将所述干扰素‑β的N‑端丝氨酸或苏氨酸残基氧化分解成醛类，和(ii)将所述醛与所述PEG的肼基甲酸酯衍生物偶联，其中所述经修饰的干扰素‑β的体外生物效力是所述偶联前所述干扰素‑β的体外生物效力的6－10倍。