[发明专利]一种茶树无性系离体再生培养的方法

摘要

本发明公开了一种茶树无性系离体再生培养的方法。该方法包括外植体选择、杀灭表面菌、初代培养、继代再生、新梢延伸和生根培养操作步骤。茶是一种富含有益人体健康的次生代谢物质的多年生木本作物，种子系有性杂交后代且自交不亲和，传统的育种方法育种周期长，效率低，无法实现品种的定向快速改良；现有的无性系再生方法再生率低，无法满足遗传转化对高频再生体系的需要。本发明方法简便易行，再生效率高，再生体系完善，为利用现代生物技术培育茶新品种提供了重要的技术支持。

主权项

一种茶树无性系离体再生培养的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)选择外植体从田间采集茶的新梢，经自来水冲洗干净；(2)杀灭表面菌将洗净的新梢切成带芽的单芽茎段，在超净台中先浸入浓度70％的乙醇溶液30s；接着置于含有0.1％吐温的浓度0.1％的升汞溶液浸泡7‑10min，并不断搅动，最后用无菌水冲洗，作为茶树初代培养的外植体；(3)初代培养将上述外植体接种在初代培养基上，置于23‑27℃、光照时间16h/d、光照强度800‑2000lx条件下进行培养；每4周继代转接一次；所述初代培养基为：1/2MS加入BA 8.88μM和IBA0.49μM；(4)离体再生将培养获得的新梢转入再生培养基1，3‑4周后，新梢基部形成愈伤，将带有愈伤的新梢转入再生培养基2，直至从新梢基部愈伤上不断分化出新芽；培养条件为23‑27℃、光照时间16h/d、光照强度800‑2000lx；所述再生培养基1为：1/2MS加入TDZ 0.05‑0.1μM和IBA 0.49μM；所述再生培养基2为：1/2MS加入BA 8.88μM和IBA 0.49μM；(5)新梢延伸新梢基部愈伤分化出的新芽需在愈伤上进行延伸，延伸培养基为再生培养基2；待愈伤分化的新芽延伸为2‑3cm的新梢时，将新梢从愈伤上切除，继续用于离体再生，再生条件、培养条件同步骤(4)；(6)生根培养切取步骤(5)中形成的新梢，用2450μM IBA处理新梢基部5min，再接种于生根培养基，培养条件同步骤(4)，所述生根培养基为：1/4MS加入0.1％活性炭；(7)移栽将步骤(6)中生根的茶无性系组培苗移栽至营养土中。