[发明专利]一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制备方法及应用，它是以磁珠为载体，人IgG为识别中间体，经过活化-偶联-洗涤-封阻的过程制备出人IgG免疫磁珠，在合适的缓冲液中于一定条件下孵育可以高效捕捉、富集检测样本中的金黄色葡萄球菌；该方法特异性强，高效快速，操作简单，价格低廉，不需要大型仪器和特殊培训的专业操作人员，样品不需要特殊前处理，可广泛应用于食品、饲料、化妆品、环境和临床中金黄色葡萄球菌的富集分离与检测。

主权项

一种用于富集金黄色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制备方法，其特征在于：该方法以磁珠为载体，偶联人IgG，制备成能够富集金黄色葡萄球菌的免疫磁珠；具体方法是：（1）活化：取磁珠放入离心管中，加入活化缓冲液洗涤磁珠，反复三次，每次间隔3~5分钟，除去活化缓冲液后加入活化剂碳二亚胺（EDC）和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）各200μL，混匀，将磁珠于22~25℃条件下震荡孵育30～60分钟，将磁珠活化；（2）偶联：用偶联缓冲液洗涤磁珠，反复三次，每次间隔3~5分钟，加入人IgG，混匀，于22~25℃条件下震荡孵育24小时，制成人IgG免疫磁珠；（3）封阻：人IgG免疫磁珠经洗涤缓冲液洗涤，反复三次，每次间隔3~5分钟，加入封阻缓冲液于22~25℃条件下作用1～2小时，存放于保存缓冲液中，4℃保存待用；上述各步骤中所述：活化缓冲液：0.1M MES和0.05%吐温‑20，pH6.0‑6.5；偶联缓冲液：0.1M MES和0.05%吐温‑20，pH7.0‑7.4；洗涤缓冲液：0.1M MES，0.1%BSA，0.05%吐温‑20；封阻缓冲液：0.2M pH8.5 Tris溶液，0.1%BSA，0.05%吐温‑20保存缓冲液：0.1M MES，pH7.4；活化剂：EDC和NHS，浓度均为1‑5mg/mL，用活化缓冲液溶解，先加入EDC，混匀后加入NHS，震荡均匀。