[发明专利]轮虫雄体整体荧光染色与精子体外观察方法有效
| 申请号： | 201110315588.6 | 申请日： | 2011-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN102433371A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 杨家新 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210046 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及轮虫雄体整体荧光染色与精子体外观察方法。该方法包括雄体轮虫收集、精巢和精子活体荧光染色和整体压片观察的步骤。本发明根据精子对特异性染色的反应标记精子颜色，借助盖玻片的微小压力促使轮虫精子释放到体外，进行活体精子形态显微观察；具有操作简便，快速，经济，便于应用的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 轮虫 整体 荧光 染色 精子 体外 观察 方法 | ||
【主权项】：
一种轮虫雄体整体荧光染色与精子体外观察方法，其特征在于包括以下步骤：（1）雄体轮虫收集；（2）精巢和精子活体荧光染色： SYBR14预先稀释50倍备用；取1.5mL离心管，加入1mL轮虫培养液，移入雄轮虫20个，加入SYBR14稀释液5µL染色10分钟、再加PI液5µL染色10分钟后整体观察；（3）整体压片观察：每次用1mL微吸管，吸取1个雄体，置于载玻片上，在距离样本0.5cm处置一盖玻片作为支撑，再在样本上方盖上盖玻片；把样本置于荧光显微镜下，在盖玻片上加少许香柏油，在紫外光下精巢包被在体腔内，发射绿色荧光；抽出支撑玻片，精子从足末端，释放出体外，30秒钟后停止游动，在10×40放大倍数下直接观察精子的形态结构。
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