[发明专利]一种利用石英晶体微天平筛选端粒酶抑制剂的方法

摘要

本发明公开了一种利用石英晶体微天平筛选端粒酶抑制剂的方法，该方法为：一、芯片表面羧基功能化；二、芯片表面活化；三、芯片表面固定端粒酶引物；四、将固定有引物的芯片装入石英晶体微天平的反应器中，向反应器中通入工作液，读取监测到的频率F1，然后通入对照液，读取监测到的频率F2，计算F1和F2的差值ΔF；五、将固定有引物的芯片装入石英晶体微天平的反应器中，向反应器中通入工作液，读取监测到的频率F1′，然后通入待测液，读取监测到的频率F2′，计算频率F1′和频率F2′的差值ΔF′，当ΔF′/ΔF≤50％时，判定待测液中含有端粒酶抑制剂。本发明采用石英晶体微天平为检测工具，具有无标记，实时检测等优势。

主权项

一种利用石英晶体微天平筛选端粒酶抑制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一、对表面修饰有自组装层的QCM芯片表面进行羧基功能化；步骤二、将碳化二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺按照1∶1的摩尔比溶解于去离子水中，得到溶质浓度为0.1M的活化液，将步骤一中经羧基功能化后的QCM芯片表面用所述活化液孵育0.5h～2h，然后用去离子水冲洗，再用氮气吹干；步骤三、将步骤二中吹干后的QCM芯片表面用氨基功能化的端粒酶引物溶液孵育1h～2h，用去离子水冲洗后用氮气吹干，得到固定有引物的QCM芯片；所述氨基功能化的端粒酶引物溶液中氨基功能化的端粒酶引物的浓度为1μM～2μM；步骤四、将步骤三中固定有引物的QCM芯片装入石英晶体微天平的反应器中，采用六通阀和蠕动泵作为进样装置，向反应器中通入工作液，待基线稳定后，读取石英晶体微天平监测到的频率F1，然后通过六通阀向反应器中加入对照液，待对照液全部进入反应器中，关闭蠕动泵，使对照液驻留在反应器中，反应0.5h～2h后，打开蠕动泵，通入工作液冲洗QCM芯片，读取石英晶体微天平监测到的频率F2，计算频率F1和频率F2的差值ΔF；所述工作液为Tris·HCl、KCl和MgCl2的混合水溶液，工作液中Tris·HCl的浓度为30mM～70mM，KCl的浓度为30mM～70mM，MgCl2的浓度为0.5mM～1.5mM；步骤五、将步骤三中固定有引物的QCM芯片装入石英晶体微天平的反应器中，采用六通阀和蠕动泵作为进样装置，向反应器中通入工作液，待基线稳定后，读取石英晶体微天平监测到的频率F1′，然后通过六通阀向反应器中加入含待测试剂的待测液，待待测液全部进入反应器中，关闭蠕动泵，使待测液驻留在反应器中，反应0.5h～2h后，打开蠕动泵，通入工作液冲洗QCM芯片，读取石英晶体微天平监测到的频率F2′，计算频率F1′和频率F2′的差值ΔF′，计算ΔF′与步骤四中ΔF的比值，当ΔF′/ΔF≤50％时，判定待测试剂为端粒酶抑制剂；所述工作液为Tris·HCl、KCl和MgCl2的混合水溶液，工作液中Tris·HCl的浓度为30mM～70mM，KCl的浓度为30mM～70mM，MgCl2的浓度为0.5mM～1.5mM。