[发明专利]一种缩短DNA模板的DNA测序方法及其应用有效
| 申请号： | 201110341269.2 | 申请日： | 2011-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN102344967A | 公开（公告）日： | 2012-02-08 |
| 发明（设计）人： | 肖鹏峰;浦丹;谢宏梅;王文捷;陆祖宏 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 210096 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种缩短DNA模板的DNA测序方法及其应用，（1）采用合成或者连接测序方法将固定DNA模板中的一小段序列测定；（2）停止该测序引物的测序，并加入四种dNTPs单体延伸测序引物链，使DNA模板成为双链；（3）缩短DNA模板：用限制性内切酶处理预先设定包含酶识别序列的连接子，将已经测定的DNA模板中的一小段序列断裂；（4）将测序引物、且包含酶识别序列的双链寡核苷酸片段，连接到上述切割后的缩短DNA模板上；（5）变性，除去未固定的DNA链，重新获得DNA模板；（6）杂交测序引物，继续对固定DNA模板中的一小段序列进行测定；（7）重复步骤（2）到（6），直到未测定DNA模板序列测定完成。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 缩短 dna 模板 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种缩短DNA模板的DNA测序方法，其特征在于（1）引入一段包含IIS限制性内切酶识别位点的目标寡核苷酸序列作为序列测定的起点，采用合成或者连接测序方法将固定DNA模板中的一小段序列测定；（2）停止该测序引物的测序，并加入四种dNTPs单体延伸测序引物链，使DNA模板成为双链；（3）缩短DNA模板：用限制性内切酶处理预先设定包含酶识别序列的连接子，将已经测定的DNA模板中的一小段序列断裂；（4）将测序引物、且包含酶识别序列的双链寡核苷酸片段，连接到上述切割后的缩短DNA模板上；（5）变性，除去未固定的DNA链，重新获得DNA模板；（6）杂交测序引物，继续对固定DNA模板中的一小段序列进行测定；（7）重复步骤（2）到（6），直到未测定DNA模板序列测定完成；所述DNA模板中的一小段序列测定是根据酶切位点距离酶识别位点的核苷酸个数确定的，已经被测序的序列片段是酶识别位点切割DNA模板的位置；DNA模板的每次制备过程中均需引入酶识别位点，酶切位点距离酶识别位点的核苷酸个数是确定的。
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