[发明专利]一种鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法

摘要

本发明公开了一种鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，本发明方法中采用A型产气荚膜梭菌处理病毒液，解决了原有制备抗原成本高的问题。所使用的稳定剂为N-2羟丙基三甲基氯化氨壳聚糖能溶于水，解决了原有稳定剂壳聚糖不溶于水的问题。所用的灭活方法为水浴56℃灭活30min，解决了加灭活剂后会降低效价的问题。所用的鸡红细胞悬液为0.5％，使判定结果更稳定，解决了判定结果不准确的问题。由于采用透析袋浓缩，解决了抗原效价低的问题。因此，本发明提供了一种低成本、效价高且稳定、安全性好的鸡传染性支气管炎病毒HA稳定抗原的制备方法。制备的IBV HA抗原可成功应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清HI抗体效价检测。

主权项

一种鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：该方法是按下述步骤进行的：(1)病毒增殖将病毒株用无菌生理盐水按体积比1∶50倍稀释后，经尿囊腔接种11日龄SPF鸡胚，每胚0.1mL，置37℃继续孵育，弃去24h前死胚，36h后取出所有胚放入4℃冰箱过夜，收集尿囊液，4℃保存备用；(2)病毒液浓缩与A型产气荚膜梭菌培养液处理将收集的尿囊液以3000‑5000rpm高速冷冻离心30min，取上清液以20000‑25000rpm高速冷冻离心50‑60min后，弃去上清液，沉淀用支气管尿囊液充分悬浮，支气管尿囊液的添加量是第一次离心后所取上清液体积的1/200‑1/100，悬浮液用透析袋进行浓缩；然后按浓缩后液体体积的10％‑50％加入产气荚膜梭菌培养液，充分混合后置37℃水浴作用2‑3h，每隔20min震荡一次，作用完毕后取出病毒液置4℃保存备用；(3)抗原的灭活(4)抗原的稳定按病毒液与稳定剂体积比3‑10∶1的比例加入稳定剂，震荡混匀后利用冷冻干燥技术冻干后即得到鸡传染性支气管炎病毒HA抗原；(5)使用鸡红细胞悬液进行抗原测定，并于4℃中判定。