[发明专利]一种用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶的制备方法。一种用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：1)凹凸棒土的酸处理，得到酸处理后的凹凸棒土；2)凹凸棒土的表面化学改性，得到具有疏水和离子交换双重吸附能力的凹凸棒土颗粒；3)脂肪酶在凹凸棒表面的固定化：按化学改性的凹凸棒土颗粒∶脂肪酶溶液＝50-80mg∶1mL；将化学改性的凹凸棒土颗粒置于脂肪酶溶液中机械搅拌，进行脂肪酶的固定化，反应结束后，经蒸馏水清，用有机溶剂浸泡，离心分离后冷冻干燥，得到用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶。该凹凸棒土固定化酶具有成本低廉，催化活性高、反复使用性能好、制备过程环保的特点。

主权项

一种用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：1)凹凸棒土的酸处理：按凹凸棒土∶盐酸溶液＝1g∶10mL，选取凹凸棒土和盐酸溶液；其中盐酸溶液浓度为4‑6mol/L；将凹凸棒土浸泡于盐酸溶液中，浸泡时间10‑20h，处理完毕后，用纯水洗至中性，得到酸处理后的凹凸棒土；2)凹凸棒土的表面化学改性：将酸处理后的凹凸棒土悬浮于反应溶剂中，得到浓度为20‑50mg/mL的悬浮液；按硅烷化试剂总量∶反应溶剂＝30‑50mmol∶1L，选取硅烷化试剂；其中，硅烷化试剂由硅烷偶联剂A和硅烷偶联剂B组成，硅烷偶联剂A与硅烷偶联剂B的摩尔比为1∶0.5‑1∶2；按催化剂的用量为反应溶剂体积的3％‑6％，准备催化剂；将硅烷化试剂和催化剂与上述悬浮液混合，得到混合物；混合物在40‑60℃，氮气保护下机械搅拌反应10‑20h，机械搅拌速度为200‑400rpm；反应结束后，采用离心分离出颗粒状物，颗粒状物用蒸馏水和甲醇交替清洗3‑5次后，得到清洗后的颗粒状物；将清洗后的颗粒状物真空干燥，得到化学改性的凹凸棒土颗粒；3)脂肪酶在凹凸棒表面的固定化：按脂肪酶∶pH 5.0‑7.0的磷酸盐缓冲溶液＝2‑5mg∶1mL，将脂肪酶加入到20‑100mmol、pH 5.0‑7.0的磷酸盐缓冲溶液中进行酶的吸附固定，得到脂肪酶溶液；按化学改性的凹凸棒土颗粒∶脂肪酶溶液＝50‑80mg∶1mL，选取化学改性的凹凸棒土颗粒和脂肪酶溶液；将化学改性的凹凸棒土颗粒置于脂肪酶溶液中机械搅拌，进行脂肪酶的固定化，反应温度15‑30℃，机械搅拌速度150‑200rpm，反应时间2‑6h，反应结束后，经蒸馏水清洗3‑5次，用有机溶剂浸泡1‑3h，离心分离后冷冻干燥，得到用于酯交换反应的凹凸棒土固定化酶。