[发明专利]一种适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法

摘要

本发明公开了一种适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法，其具体步骤为：材料培养；预处理；固定；保存；解离；染色、涂片和压片；镜检和观察。本发明所述的制备方法成本低、操作过程更为简便快捷并能获得更理想的悬钩子属植物核型分析的染色体标本。

主权项

一种适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法，其特征在于，其具体步骤为：1)材料培养通过茎扦插繁殖获取不定根，取3‑5个节位的嫩梢或硬枝，扦插于塑料大棚以蛭石为基质的插床中，进行常规管理，待不定根长至1‑2cm时，取健壮插穗的正在生长的根尖；2)预处理用0.002mol L‑1 8‑羟基喹啉0‑4℃下预处理24h；3)固定将步骤2)处理的根尖置于卡诺氏固定液I(无水乙醇∶乙酸＝3∶1，v/v，)在0‑4℃下固定24h；4)保存将步骤的材料置于70％的乙醇中，冰箱中冷臧备用；5)解离取出步骤4)固定好的根尖，流水冲洗约3min，吸水纸吸干，放入小试管中，加3‑5ml的1mol L‑1的HCl于60±0.5℃水浴解离60‑90s，然后将HCl溶液用胶头吸管吸出，终止解离，用重蒸馏水洗涤3次，保存在重蒸馏水中备用；6)染色、涂片和压片取根尖置于载玻片上，用刀片切除根冠，再切分生区置于载片上，用镊子或解剖针将将材料分割成若干小块，并用解剖针轻轻涂匀；然后加1/2‑1滴改良苯酚品红染液于材料上，再用解剖针轻轻涂抹，使小块尽可能分散在染液中，盖上盖玻片；将正在处理的载玻片一边斜靠在在火柴头上，从上一侧在盖玻片处再滴一滴改良苯酚品红染液，点燃一盏酒精灯，烘烤处理的材料，烘烤1‑2min，将载玻片大小的滤纸条折叠，用一手2个指头压住覆有滤纸条盖玻片的两个角，以免盖片移动，另一只手用解剖针头或有橡皮的的铅笔头对准材料轻轻敲击盖玻片，使材料均匀分散为一薄层为止，在显微镜上镜检观察，看材料是否分散以及是否有分裂相，最后用大拇指紧压盖有盖玻片的装片处；7)镜检和观察镜检观察，用奥林巴斯BX‑51型显微镜观察，若染色体效果不尽理想，重复步骤6)，直至获得理想的染色体标本为止，然后DP70摄像头拍照、CCD分析软件进行照片处理。