[发明专利]一种花粉管介导的玉米原位转基因方法

摘要

一种花粉管介导的玉米原位转基因方法，属于农业生物和现代农业技术领域，采用种植受体玉米、菌种准备、转化操作和收获及筛选转化子步骤完成，其中转化操作是在20-25℃天气温度操作，用剪刀将距离雌穗顶端1cm的花丝剪平，将感染液注入包叶内，滴入量2-4ml，套上纸袋，经过1.5小时后人工授粉。本发明方法具有低成本、周期短、转化效率高和基因型限制小的优点，同时，由于不用组织培养，为进一步的无选择标记转化建立了基础系统。

主权项

一种花粉管介导的玉米原位转基因方法，其特征是采用如下步骤完成：(1)种植受体玉米，按正常管理至开花期；(2)菌种准备，平板菌种贮藏于4℃冰箱，每周活化一次，一个月后用YEP液体培养基于21℃培养三天至对数期，OD600＝1，离心取出菌体，重悬至侵染培养基，调节密度在OD600＝0.7‑1，23‑25℃摇床培养4‑5小时，制成感染液，用来侵染；(3)转化操作，在20‑25℃天气温度操作，用剪刀将距离雌穗顶端1cm的花丝剪平，将感染液注入包叶内，滴入量2‑4ml，套上纸袋，经过1.5小时后人工授粉；，(4)收获及筛选转化子。待玉米成熟后收获，筛选时，将种子用筛选剂溶液处理，然后播于蛭石介质的盘中筛选，或待出苗后涂抹叶片，选出抗性苗，经分子检测获得阳性株后，移栽至大花盆或直接进入田间。