[发明专利]羊痘病毒属病毒等温扩增技术快速检测用引物、试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种基于LAMP等温扩增技术快速检测羊痘病毒属病毒用引物、试剂盒及检测方法。该试剂盒根据靶序列上6个区域设计4条引物，2条外引物和2条内引物，还包括2×LAMPbuffer缓冲液、BstDNA聚合酶管、阳性对照、阴性对照和灭菌去离子水。利用本试剂盒在63℃左右的温度下经15～45min的反应后，便可以根据肉眼观察反应结果判断是否含有羊痘病毒属病毒。本发明可以在等温条件下快速、高效、特异性地扩增靶序列，且操作简便，不需要昂贵的仪器和试剂，可以凭肉眼判断结果，对操作人员没有技术上的要求，检测成本低，检测时间短。

主权项

一种羊痘病毒属病毒等温扩增技术快速检测用试剂盒，其特征在于：它包括扩增反应液管、钙黄绿素显色剂管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，其中：所述扩增反应液管 管内由以下反应液组成：DNA序列为SEQ ID NO1的60 mmol/L的羊痘病毒内引物上游1.0 μL；DNA序列为SEQ ID NO2的60 mmol/L的羊痘病毒内引物下游1.0 μL；DNA序列为SEQ ID NO3的5 mmol/L的羊痘病毒外引物上游1.0 μL；DNA序列为SEQ ID NO4的5 mmol/L的羊痘病毒外引物下游1.0 μL；2×LAMP buffer 缓冲液 12.5μL；5U/μL Bst DNA 聚合酶 0.8μL；灭菌去离子水 3.7μL；合计21 μL，为单次反应的用量；所述阳性对照管，管内为羊痘病毒阳性重组质粒DNA，体积为20μL；序列为SEQ ID NO5的PCR上游引物和序列为SEQ ID NO6的PCR下游引物按常规进行PCR扩增，将PCR产物与pmd19载体进行连接反应获得所述阳性重组质粒DNA;所述阴性对照管，管内为无羊痘病毒感染的健康牛上皮组织基因组DNA，体积为20μL；所述钙黄绿素显色剂管，管内体积为20μL；所述灭菌去离子水管 1mL～2mL。