[发明专利]一种人白血病细胞胞质体的制备及鉴定方法

摘要

本发明公开了一种人白血病细胞胞质体的制备及鉴定方法，经纯化的人白血病HL-60细胞用细胞松驰素和秋水酰碱处理，在34℃条件下离心脱核，收集胞质体组份经Percoll密度梯度离心法纯化得到纯化的胞质体；采用DAPI和CFSE荧光双染色鉴定胞质体。本发明方法可使非贴壁生长的人白血病HL-60细胞的脱核率达90%以上，纯化的胞质体纯度达95%以上，直径≥5μm的胞质体达81%，嗜染CFSE荧光探针的胞质体可直接用于后续研究；经本发明方法获得的HL-60细胞胞质体可广泛用于白血病细胞胞质成分及其代谢和功能、细胞重构、细胞分化、细胞凋亡等研究；本发明方法适用于所有体外非贴壁生长肿瘤细胞胞质体的制备及鉴定。

主权项

一种人白血病细胞胞质体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：第一，取对数生长期人白血病HL‑60细胞，离心后去上清，沉淀用培养基悬浮，取Percoll溶液于离心管中，将上述细胞悬液铺于Percoll溶液面，离心去除白膜层，沉淀用无血清DMEM悬浮，得到纯化的HL‑60细胞悬液；第二，将上述纯化的HL‑60细胞悬液加入细胞松驰素和秋水酰碱，孵育，离心去除上清，留细胞沉淀；第三，将上述的细胞沉淀再悬浮于含细胞松驰素的Percoll溶液中，加入超速离心管中配平，转子提前预热，水平离心吸弃上清，收集Percoll液面上的部分，加入预冷的DMEM混匀，离心去除上清，沉淀用DMEM悬浮，再离心去除上清，沉淀用DMEM悬浮，得到胞质体悬液；第四，将上述的胞质体悬液铺于Percoll液面上，水平离心吸取白膜层，加入DMEM混合，离心除去上清，用DMEM悬浮，得到人白血病细胞胞质体。