[发明专利]一种微生物总基因组DNA的提取方法无效
| 申请号： | 201110405923.1 | 申请日： | 2011-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN102409041A | 公开（公告）日： | 2012-04-11 |
| 发明（设计）人： | 王亭芳;常忠义;高红亮;赵云龙;金风杰 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种微生物总基因组DNA的提取方法，向待提取样品中加入裂解液和溶菌酶，使细菌细胞充分破裂并释放DNA；将获得的粗提DNA经过酚/氯仿/异戊醇提取液抽提后得到经纯化的微生物总基因组DNA。本发明提取方法具有DNA释放量大、实验条件简易、成本低等有益效果。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 微生物 基因组 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将TENP洗液加入待提取样品中，再经过8000rpm，4℃，离心得到沉淀；（2）向所述沉淀加入裂解液和溶菌酶溶液，于37℃进行水浴后，充分涡旋震荡；（3）加入SDS溶液和蛋白酶K溶液，依次于55℃、70℃下进行水浴，于17000g，4℃，离心得上清；（4）用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提液对所述步骤（3）得到的上清进行抽提，经离心得上清，重复用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提液抽提一次；（5）用等体积的氯仿/异戊醇抽提液抽提，离心得上清；（6）向所述步骤（5）得到的上清中加入异丙醇，室温下静置，离心得到DNA沉淀；（7）用乙醇将所述DNA沉淀重悬，离心后弃上清，经干燥得到沉淀；（8）用TE溶液将所述步骤（7）得到的沉淀溶解，得到所述微生物总基因组DNA，置于‑20℃保存备用。
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