[发明专利]一种检测环境中二恶英类物质的方法

摘要

本发明涉及一种检测环境中二恶英类物质的方法，采用大鼠肝细胞瘤H4ⅡE细胞作为检测手段，贴壁培养24h后，加入环境样品的有机溶剂提取液或用有机溶剂溶解的化学品，继续培养72h后，通过测定EROD酶活性，以2,3,7,8-TCDD为标准化合物，绘制2,3,7,8-TCDD对H4ⅡE细胞的EROD酶活力诱导的剂量-效应关系标准曲线，进而评价样品中二恶英类化合物的毒性效应。本发明的操作简便，造价低廉，检测时间短，高通量，能够作为环境样品和可疑类二恶英化合物的快速筛查手段。

主权项

一种检测环境中二恶英类物质的方法，其特征在于包括以下步骤：1）大鼠肝细胞瘤H4ⅡE细胞的培养（a）冻存：在DMEM培养基中加入20%血清和10%DMSO配制成冻存液，将大鼠肝细胞瘤H4ⅡE细胞混匀液加入冻存管中，离心后吸出上清，加入冻存液吹打均匀，放入冻存盒置‑80℃冰箱梯度降温3h以上，然后转放入液氮罐中保存;（b）复苏：从液氮罐中快速取出装有冻存细胞的冻存小管，于37℃水浴融化，离心、吸去上清液，加入10mL含15%胎牛血清的DMEM培养基吹散均匀，置于5％CO2的恒温箱37℃条件下培养；（c）传代培养：24h后取出细胞培养瓶，用弯头吸管将培养基吸出，用PBS缓冲液清洗3遍，加入0.05%DMEM胰蛋白酶37℃条件下消化3min，加入含12% 胎牛血清的DMEM培养基，反复吸取培养液轻轻吹打瓶壁上的细胞层至全部冲下，混匀吸取细胞悬液于新的培养瓶中，在细胞瓶中添加新的12% 胎牛血清的DMEM培养基，于含5％CO2的培养箱中37℃条件下培养；2）环境中二恶英类物质的检测（a）接种：取步骤1）得到的生长良好的H4IIE细胞，弃去培养液，加入 DMEM 胰酶消化，倒置显微镜观察消化情况，消化完全后加入新鲜配制的含胎牛血清和双抗的培养液终止消化，滴管轻轻将细胞吹打脱壁，吸至无菌洁净锥形瓶中添加培养基进行细胞浓度调节，混匀后取5μL用血小球计数板计数；按每孔2×105个细胞接种到96孔板，于含5％CO2的培养箱中37°C条件下培养24h；（b）上样：取出上述步骤（a）得到的96孔板，弃去培养液。