[发明专利]一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法

摘要

本发明公开了一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法，包括以下步骤：a：标准曲线的建立步骤：b：样品的检测步骤；本发明与现有技术相比，该发明中提供的塑化剂邻苯二甲酸二乙酯(DEP)抗体的特异性强，在交叉反应试验中，对检测的几大邻苯二甲酸酯类物质几乎无任何交叉反应，因此其选择性很高，从而简化了样品前处理过程。本发明的灵敏度为0.0049ng/ml，较之文献报道用直接竞争酶联免疫法测定DEP的浓度(Analytical Biochemistry 406(2010)24-28)0.096ng/ml，灵敏度明显提高，与标准方法高效液相色谱法0.88ng/ml比较，灵敏度提高了两个数量级。

主权项

一种邻苯二甲酸二乙酯的检测方法，包括以下步骤：a：标准曲线的建立步骤：在建立邻苯二甲酸二乙酯的标准曲线之前，先配制不同浓度的标准品：邻苯二甲酸二乙酯标准品用1‑2mL的无水乙醇溶解后，用稀释液稀释至一系列浓度，分别为0.0048ng/ml、0.0097ng/ml、0.14ng/ml、0.29ng/ml、1.2ng/ml、2.3ng/ml、9.3ng/ml、18ng/ml：竞争时加入这一系列浓度的标准液，测定结果的平均值经过Origin6.0软件处理后绘制成标准曲线；(1)包被步骤：用邻苯二甲酸二乙酯包被抗原包被96孔酶标板，每孔100μL，放置培养箱37℃温育2h后，从培养箱内取出，甩掉孔内溶液，再用洗涤液洗涤并甩干，每次洗涤3‑5min，总共洗涤3次；(2)封闭步骤：在包被好的酶标准版中加入1％卵清蛋白溶液，每孔150μL，37℃温育30min后，甩掉孔内溶液，再用洗涤液洗涤并甩干，每次洗涤3‑5min，总共洗涤3次；(3)竞争步骤：每孔加入50μL邻苯二甲酸二乙酯标准溶液和50μL邻苯二甲酸二乙抗体，37℃下温育3h后，从培养箱内取出，甩掉孔内溶液，再用洗涤液洗涤并甩干，每次洗涤3‑5min，总共洗涤3次；(4)显色步骤每孔加入100μL酶标羊抗兔抗抗体，37℃下温育3h后，从培养箱内取出，甩掉孔内溶液，再用洗涤液洗涤并甩干，每次洗涤3‑5min，总共洗涤3次；每孔加入100μL底物液，37℃下温育30min，从培养箱内取出，每孔加入50μL终止液；(5)检测步骤：用多功能酶标仪测定各孔在波长为490nm吸收光强度；b：样品的检测步骤除(3)竞争步骤：每孔加入50μL样品溶液和50μL的邻苯二甲酸二乙酯抗体，37℃下温育3h后，从培养箱内取出，甩掉孔内溶液，再用洗涤液洗涤并甩干，每次洗涤3‑5min，总共洗涤3次；外，其余与a：标准曲线的建立步骤相同。