[发明专利]对高等植物复杂基因组基因进行富集建库和SNP分析的方法

摘要

本发明提供了一种适合含有复杂基因组的高等开花植物基因区的建库方法。在本发明的方法中，使用甲基化敏感酶替代常规的非甲基化敏感酶对基因组进行基因区富集，之后进行建库。本发明还提供了一种适合含有复杂基因组的高等开花植物的寻找SNP的方法。

主权项

一种构建基因组富集基因区测序文库的方法，包括如下步骤：1)用甲基化敏感酶对从一个或多个样本提取的基因组DNA进行酶切，获得DNA片段；2)对所述DNA片段进行第一接头连接，获得具有第一接头的连接产物，其中在多个样本基因组DNA的情况下，每种样品的DNA片段连接的第一接头带有不同标签序列，并将连接第一接头后的连接产物混合；3)对所述具有第一接头连接产物进行打断及片段回收，获得回收产物；4)对所述回收产物进行末端修复，获得经过末端修复的DNA片段；5)对所述经过末端修复的DNA片段的3′端加碱基A，获得具有粘性末端A的DNA片段；6)对所述具有粘性末端A的片段进行第二接头连接，获得具有第二接头的连接产物；7)对所述具有第二接头连接产物进行PCR扩增，获得扩增产物，所述扩增产物构成所述基因组富集基因区测序文库；其中，任选地，步骤1)中的甲基化敏感酶为HpaII、AclI和HpvCH4IV的至少一种；任选地，步骤1)中的样本来源于高等植物，优选所述样本来源于基因组中含重复序列大于等于80％的高等植物。