[发明专利]一种木质素降解酶及其制备方法与它的用途

摘要

本发明涉及一种木质素降解酶及其制备方法与它的用途。该木质素降解酶制备方法包括烟草梗丝水煮、液体发酵、离心分离、超滤浓缩、透析处理与柱层析纯化等步骤。该烟草梗丝木质素降解酶生产方法与现有的其他方法相比，产生了酶活性更高、更有针对性的降解烟草梗丝木质素并可直接应用于梗丝前处理的有益效果。

主权项

一种木质素降解酶的制备方法，其特征在于该方法步骤如下：A、在常压与温度90～100℃的条件下，烟草梗丝按照其与水的重量比1∶100～500用水煮2.0～3.0h，得到一种固液混合物；B、然后，按照烟草梗丝量2～10g/L，往步骤A)得到的固液混合物中添加10～20g/L葡萄糖、0.05～0.30g/L酒石酸铵、0.05～0.30g/L尿素、5mmol/L藜芦醇、1mL/L微量元素混合液，混合均匀后得到的混合液作为培养基；然后分装，在温度121℃与0.1Mpa的条件下灭菌18～25min，冷却后按照接种量以所述培养基体积计6～15％接种白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)CICC 40299菌种，然后在温度28～32℃与转速140～160r/min的条件下培养8～12天；C)将步骤B)培养得到的发酵混合物通过离心分离得到上清液，弃去沉淀；D)将步骤C)得到的上清液采用超滤浓缩、用分子量8000的透析袋透析，再采用DEAE‑Sephadex A‑50柱层析或DEAE‑Sepharose‑F.F.离子交换处理进行纯化，检测洗脱液蛋白含量及含木素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶活力，得到含木素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶。