[发明专利]高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法

摘要

本发明涉及一种高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，包括：培养无菌外植体步骤，对桉树杂交品种的带腋芽茎段依次进行消毒子步骤、腋芽萌发培养子步骤、丛生芽培养子步骤、生根苗培养子步骤及白化苗培养子步骤，获得白化苗作为无菌外植体；愈伤组织的诱导步骤，将无菌外植体切段后接种到B5培养基上进行愈伤诱导，先暗培养再弱光照培养，形成愈伤组织；芽诱导培养分化不定芽步骤，将愈伤组织转移到芽诱导分化培养基上培养，每隔14-25天转移到成分相同的芽诱导分化培养基上继代培养，使愈伤组织分化不定芽。本发明以桉树白化苗茎段为无菌外植体，经愈伤组织诱导和芽诱导分化出不定芽，可用于DH32-29及其它优良杂交种无性系，高效稳定，再生效率高于70%。

主权项

一种高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于，包括如下步骤：培养无菌外植体步骤，以2‑4年生桉树杂交品种的带腋芽茎段为培养原材料，依次进行消毒子步骤、腋芽萌发培养子步骤、丛生芽培养子步骤、生根苗培养子步骤及白化苗培养子步骤，获得白化苗作为无菌外植体；愈伤组织的诱导步骤，将无菌外植体切段成合适的长度，接种到含0.05‑2.0mg/L N‑(2‑氯‑4‑吡啶基)‑N‑苯基脲、0.01‑0.1mg/L萘乙酸、10‑500mg/L腐胺和1‑50mg/L亚精胺的B5培养基上进行愈伤诱导，先暗培养5‑15天，再弱光照培养5‑20天，形成愈伤组织；芽诱导培养分化不定芽步骤，将愈伤组织转移到芽诱导分化培养基上培养，且每隔14‑25天转移到成分相同的芽诱导分化培养基上继代培养14‑100天，使愈伤组织分化不定芽，所述芽诱导分化培养基是含有10‑40mg/L腐胺，0.5‑3.0mg/L亚精胺的B5培养基。