[发明专利]一种含有D型氨基酸的双羰基还原酶的突变体的制备方法有效
| 申请号： | 201110428826.4 | 申请日： | 2011-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN102517241A | 公开（公告）日： | 2012-06-27 |
| 发明（设计）人： | 刘智志;杨欣;陈依军 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/02;C12N15/63;C12R1/19 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 陶海锋 |
| 地址： | 210009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备含D型赖氨酸的蛋白质和多肽的方法：在表达性质粒的特定酶切多克隆位点引入了目的蛋白的表达基因，并且将所述表达基因的目的位点突变成为TAG密码子；在该表达性质粒的另一个特定酶切多克隆位点引入ph氨酰tRNA合成酶的序列，得到重组质粒；制备pAC-ph△-AK3质粒；由pAC-ph△-AK3质粒和重组质粒共转染到宿主中，得到表达系统；在培养基中添加D型赖氨酸，诱导上述表达系统表达目的蛋白，纯化得到目的蛋白。利用来源于Pyrococcushorikoshii的赖氨酰tRNA合成酶、抑制型tRNA分子对对D型赖氨酸能专一选择琥珀密码子TAG的特性在双羰基还原酶中定点引入D型赖氨酸，引入效率接近100%，具有广泛的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 含有 氨基酸 羰基 还原酶 突变体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种大肠杆菌原核表达系统，其特征在于，所述大肠杆菌原核表达系统含有带有p15A复制子的pAC‑ph△‑AK3质粒和带有ColE1复制子的pETDuet‑T2DK‑DKR质粒。
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