[发明专利]一种基于家蚕杆状病毒多角体溶解特性的融合蛋白纯化方法

摘要

本发明涉及一种基于家蚕杆状病毒多角体溶解特性的融合蛋白的表达、纯化方法和用于实施上述融合蛋白表达、纯化方法的高效融合表达载体。本发明将家蚕多角体基因(Polh)与目的蛋白基因构建到原核表达载体中，并在二者之间引入一个蛋白酶酶切位点，使其在原核表达菌中融合表达；利用多角体蛋白在碱性条件下溶解而中性条件下沉淀的溶解度特性，通过不同pH值缓冲液对诱导菌体超声后的沉淀进行洗涤，将最后收集所得沉淀用高pH的缓冲液溶解，离心后将收集的上清pH值调回到中性条件，离心收集沉淀即为分离纯化得到的融合蛋白；特异性蛋白酶酶切纯化后融合蛋白的多角体蛋白标签，再通过镍柱分离纯化得到目的蛋白，建立了原核表达的基于家蚕多角体蛋白溶解度特性的融合蛋白纯化方法。

主权项

一种在原核表达载体中表达外源蛋白的方法，其特征在于：将家蚕多角体基因(Polh)与外源目的蛋白基因置于同一阅读框中进行融合表达，所述家蚕多角体基因与外源目的蛋白基因之间包括编码蛋白酶酶切位点的linker；所述的家蚕多角体基因、编码蛋白酶酶切位点的linker以及外源目的蛋白基因三者之间可操作性的连接；所述的家蚕多角体基因还带有纯化和/或鉴定标签；用针对linker编码酶切位点的蛋白酶切割所表达的融合蛋白，能够产生外源目的蛋白。