[发明专利]通过分子计数提高等位基因调用的置信度

摘要

本发明的方面包括用于确定个体多核苷酸分子的数量的方法和组合物，所述个体多核苷酸分子来源于已在特定序列分析配置或过程中测序的相同原始样品的相同基因组区域。在本发明的这些方面，将简并碱基区域(DBR)附接到随后将进行测序（例如，在进行某些过程步骤后，例如扩增和/或富集步骤后）的起始多核苷酸分子。存在于测序运行中的不同DBR序列的数量可用于确定/估计已进行测序的不同起始多核苷酸的数量。DBR可用于增强许多不同的核酸序列分析应用，包括允许在基因分型应用中实现更高置信度的等位基因调用测定。

主权项

一种估计多个样品中所测序的起始多核苷酸分子的数量的方法，所述方法包括：将衔接子附接到多个不同样品中的起始多核苷酸分子，其中每个样品对应的所述衔接子包含：所述样品特定的单一MID；和简并碱基区域(DBR)，其包含选自以下的至少一个核苷酸碱基：R、Y、S、W、K、M、B、D、H、V、N及其修饰形式；将所述多个不同的衔接子附接的样品混合以生成混合样品；扩增所述混合样品中的所述衔接子附接的多核苷酸；对多个所述扩增的衔接子附接的多核苷酸测序，其中获得所述多个衔接子附接的多核苷酸的每一个的所述MID、所述DBR和所述多核苷酸至少一部分的序列；以及确定存在于来自每个样品的所述多个测序衔接子附接的多核苷酸中的不同DBR序列的数量，以确定已在测序步骤中测序的每个样品中的起始多核苷酸的数量。