[发明专利]实时切割分析

摘要

本发明提供基于切割的实时PCR分析方法。一般而言，所述分析方法包括：使包括a）扩增核酸靶的PCR试剂和b）在扩增的靶上进行活瓣切割分析的活瓣切割试剂的反应混合物经受两组热循环条件。所述第一和第二组循环之间不向反应加入额外的试剂，并且，第二组循环的每个循环中，测量活瓣探针的切割。

主权项

一种样品分析的方法，包括：使包括以下的反应混合物：用于扩增核酸靶的PCR试剂，以及于所述核酸靶上进行活瓣切割分析的活瓣切割试剂，经受如下热循环条件：第一组5～15个循环：(i)至少90℃的第一温度；(ii)范围为60℃～75℃的第二温度；(iii)范围为65℃～75℃的第三温度；随后是：第二组20～50个循环：(i)至少90℃的第四温度；(ii)比所述第二温度低至少10℃的第五温度；(iii)范围为65℃～75℃的第六温度；其中第一和第二组循环之间不向所述反应加入额外的试剂，并且，在第二组循环的每个循环中，测量活瓣探针的切割；其中所述方法不用于疾病的诊断或治疗目的；其中所述方法包括在所述反应混合物处于所述第五温度时测定所述活瓣探针的切割；其中在所述20～50个循环的每个循环期间通过检测所述反应混合物的荧光测量所述活瓣探针的切割；且其中：所述PCR试剂包括：核酸模板，第一PCR引物，第二PCR引物，热稳定的聚合酶，和核苷酸；以及所述活瓣切割试剂包括：侵入寡核苷酸，活瓣探针，活瓣核酸内切酶和FRET盒，其中所述第一PCR引物和所述侵入寡核苷酸具有相同的核苷酸序列。