[发明专利]一种淀粉基质专用水稻的转基因培育方法

摘要

本发明涉及一种淀粉基质专用水稻的转基因培育方法，步骤包括：取低直链淀粉含量的水稻品种的成熟胚为外植体，诱导愈伤组织，继代培养至成倍增殖期，暗条件预培养，进行农杆菌共培养转化，转移到筛选培养基进行3轮筛选，取抗性愈伤组织诱导分化成苗，对抗性植株进行组织化学染色和分子检测，鉴定含目的基因的分化小苗，对入选的转基因植株测定淀粉凝胶性能，选留淀粉糊化冷却后可形成半固态凝胶的转基因植株，继续种植评价的淀粉凝抗性表达稳定性，对淀粉凝抗性稳定的优良株系进行种子繁殖，最终培育淀粉基质专用水稻。本发明的淀粉基质专用水稻，可作为新颖生物培养基质，广泛用于科研、食品、医药和化工。

主权项

一种淀粉基质专用水稻的转基因培育方法，包括以下步骤：1）取直链淀粉含量介于10%~15%的水稻品种的成熟胚为外植体，接种至诱导培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导形成愈伤组织； 2）将诱导形成2周的愈伤组织，转移至继代培养基，继代培养至愈伤组织进入成倍增殖期； 3）将成倍增殖的愈伤组织，在25±1℃、避光的黑暗条件下进行受体愈伤组织的预培养2天；4）将经过预培养的愈伤组织，在农杆菌悬浮液中浸泡10分钟，之后弃去菌液，用无菌滤纸吸干，接种于共培养基上，在25±1℃、避光的黑暗条件下共培养2天；5）将上述共培养愈伤组织，洗净、晾干后，转移到筛选培养基，在25±1℃、避光的黑暗条件下培养6周，收集新长出的抗性愈伤组织，转移至新的筛选培养基上，再进行连续2轮继代筛选，每隔3周转继１次；6）取3轮筛选后的抗性愈伤组织，转移至分化培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导分化成苗，对抗性植株进行组织化学染色和分子检测，选留含目的基因插入序列的转基因植株，所说的目的基因插入序列是指包括目的基因淀粉分支酶基因sbeIIb、标记基因葡糖苷酸酶基因GUS和筛选基因抗潮霉素基因HPT的插入序列，目的基因淀粉分支酶基因sbeIIb片段长643bp；7）取入选的转基因植株，田间种植后收获种子，鉴定淀粉凝胶性能，选留淀粉糊化冷却后可形成半固态凝胶的转基因植株；8）继续种植步骤7）筛选的转基因株系，评价的淀粉凝抗性表达稳定性，对淀粉凝抗性稳定的优良株系进行种子繁殖，为培育的淀粉基质专用水稻。