[发明专利]肿瘤靶向光敏免疫偶联物的制备方法及其应用

摘要

本发明提供了一种高活性的酞菁锌‑单克隆抗体肿瘤靶向光敏免疫偶联物的制备方法及其抗肿瘤应用的技术方法。利用结构单一的单羧基酞菁锌与五聚赖氨酸酰肼反应，形成水溶性的高反应活性的单羧基酞菁锌酰肼衍生物，同时选择具有抗肿瘤活性的单克隆抗体，在中性条件下，用高碘酸钠温和的氧化与抗体活性无关的糖基为醛基，4℃，过量的单羧基酞菁锌酰肼衍生物极易与之反应，并进一步还原成稳定的光敏免疫偶联物，得到高纯度的光敏免疫偶联物。本法制备的特点是低温、中性条件、不用任何有机溶剂。并通过体外抗肿瘤实验证实该偶联物具有很好的选择性和抗肿瘤活性，具有应用价值。

主权项

酞菁锌‑单克隆抗体肿瘤靶向光敏免疫偶联物的制备方法，其特征在于：利用单取代酞菁衍生物与单克隆抗体共价偶联，所述单取代酞菁衍生物是水溶性单羧基酞菁锌酰肼衍生物ZnPC‑CO‑5K‑NHNH2，所述的单克隆抗体是具有如下特征的单克隆抗体：1)分子量：150‑170KDa；2)吸光特性：280nm具有特征吸收峰；3)生物学特性：单克隆抗体，能特异性识别肿瘤细胞表面生长因子受体，并与之发生抗原‑抗体反应；所述制备方法包括：1)将单羧基取代酞菁锌ZnPc‑COOH与表面带有五聚赖氨酸的树脂反应，再用水合肼肼解，脱去保护基，形成水溶性单羧基酞菁锌酰肼衍生物ZnPC‑CO‑5K‑NHNH2；2)抗体氧化：单克隆抗体在PH7.2的磷酸盐缓冲液中，加入终浓度10mM的高碘酸钠，25℃氧化30min后，加入终浓度10mM的抗坏血酸，将残留的高碘酸钠彻底还原成碘离子；3)将氧化后的单克隆抗体与ZnPC‑CO‑5K‑NHNH2偶联，取氧化后的单克隆抗体与单羧基酞菁锌酰肼衍生物按摩尔比1∶10，溶于PH7.2的磷酸盐缓冲液中，混匀，4℃冰箱避光涡旋震荡过夜后，加入还原剂，4℃冰箱，反应4h，形成稳定偶联物。