[发明专利]一种蛇伤快速鉴别的方法

摘要

本发明公布了一种用酶标条为载体的蛇伤快速鉴别方法，即以蛇毒物种特异性抗体包被酶标孔，将采集的蛇伤患者血清滴至孔内，能在短时间内判断出蛇伤类型。本方法中各种特异性抗体的筛选、酶标条和测试过程辅助试剂的制备成本低；检测过程简单，无需借助仪器，检测人员无需丰富的临床诊断经验；检测时间短，从低温下取出酶标条到结果显色约40-45分钟；准确性高，AB-双抗夹心法能有效保证蛇毒与特异性抗体结合，生物素-亲和素有效放大信号，肉眼能直接观测显色结果。

主权项

一种蛇伤快速鉴别的方法，其特征步骤在于按如下步骤进行：(1)制备抗蛇毒免疫球蛋白(IgG)。选取所需鉴别的6种蛇毒(眼镜蛇、银环蛇、五步蛇、蝮蛇、竹叶青和烙铁头蛇毒)，皮下多点注射大鼠，制备6种多克隆抗蛇毒粗血清。粗血清先经过硫酸铵沉淀去除非蛋白组分，再通过Hitrap protein IgG柱纯化，获得抗蛇毒IgG。(2)筛选蛇毒物种特异性IgG。将蛇毒偶联至活化的CNBr‑activated sepharose 4B亲和介质上，等量任取5种蛇毒偶联后的湿润亲和介质共0.3g混合后装入离心浓缩管内管。室温下，500μg的每种蛇毒的抗血清IgG分别与其余种蛇毒偶联的亲和介质在水平摇床温和地混匀2小时。随后离心，用离心浓缩管外管收集未结合组分的洗出液，即为该种蛇毒区别于其它5种蛇毒的物种特异性IgG。(3)蛇毒特异性IgG生物素化。特异性抗体和生物素重量比1∶5混合后，室温震荡结合2小时，随后透析去除未结合生物素，得到生物素化特异性IgG。(4)检测酶标条制作。以8孔酶标条为载体，配有一个“T”形支架。酶标条上设置6个样品检测孔，1个阳性和1个阴性对照孔。各孔经2％牛血清封闭，漂洗控干后在‑20度保存。(5)蛇伤快速鉴别。检测时，采集蛇伤患者伤口部位流出液，滴加至各检测孔，依次经过生物素化特异性抗体、亲和素化HRP的结合后，加入TMB显色，根据检测孔的阳性或者阴性结果准确判断蛇伤类型。