[发明专利]构树内生真菌的分离筛选方法及其用途

摘要

本发明提供一种耐重金属Zn的构树内生真菌的分离筛选方法，及构树内生真菌在修复重金属污染土壤中的应用，本发明还提供一种具有抗人肝癌细胞活性的构树内生真菌的分离筛选方法、一种具有抗人肝癌细胞活性的发酵液的制备方法，及构树内生真菌在制备抗人肝癌细胞活性药物中的应用，本发明还提供一种具有抗炎活性的构树内生真菌的分离筛选方法、一种具有抗炎活性的发酵液的制备方法，及构树内生真菌在制备抗炎活性药物中的应用，本发明的优点在于从构树中成功筛选出耐重金属Zn、具备抗人肝癌细胞活性、具备抗炎活性的构树内生真菌，提供了有效的菌种分离筛选方法，为重金属污染土壤的生物修复提供了切实可行的方法，并且开辟了抗癌、抗炎药物研发的新途径。

主权项

一种耐重金属Zn的构树内生真菌的分离筛选方法，其特征在于，它包括以下步骤：（a）材料预处理：采集新鲜构树的根、茎段和成熟叶，用双蒸水冲洗干净后，无菌水略洗；（b）材料消毒：将步骤（a）的构树成熟叶用75% EtOH 漂洗1min，无菌水冲洗，2.5% NaClO漂洗3min，无菌水冲洗，75% EtOH漂洗0.5min，无菌水冲洗；步骤（a）的构树根和茎段用75% EtOH漂洗1min，无菌水冲洗，5% NaClO漂洗3min，无菌水冲洗，75% EtOH漂洗0.5min，无菌水冲洗；（c）构树内生真菌的分离：将步骤（b）的成熟叶用无菌滤纸吸干水分后切成组织块，根、茎段剥去根皮亦切成组织块，接入PDA培养基；（d）构树内生真菌的纯化：将分离繁殖出的不同种类的构树内生真菌接入PDA平板纯化；（e）含重金属Zn的培养基的配制：PDA培养基高温灭菌后，加入150‑250 mmol/L无菌的ZnSO­4 • ­7H2O轻轻振摇使其溶解均匀；（f）耐受重金属Zn构树内生真菌的筛选：将步骤（d）所分构树内生真菌接种在步骤（e）的培养基上，26℃培养一周，挑出长出的菌落，即为重金属Zn耐受菌株。