[发明专利]同时检测柑桔4种重要病原的一步法多重PCR检测方法无效
| 申请号： | 201210046017.1 | 申请日： | 2012-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN102586481A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 刘金香;周常勇;李中安;唐科志;王雪峰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院柑桔研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所 50211 | 代理人： | 郭云 |
| 地址： | 400712 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时检测柑桔4种重要病原的一步法多重PCR检测方法，通过对4种重要嫁接传播病原柑桔衰退病毒，柑桔裂皮病类病毒，柑桔碎叶病毒，柑桔黄龙病菌的引物优选，以及对引物浓度，PCR扩增条件等的优化，实现了同时检测柑桔4种重要嫁接传播病原。本发明检测方法快速准确，避免了常规PCR的重复检测，检测的稳定性好，特异性强，一致性高，适用于大规模推广，可以用于指导引进品种和推广苗木的无毒化，确保柑桔安全生产。 | ||
| 搜索关键词： | 同时 检测 柑桔 重要 病原 一步法 多重 pcr 方法 | ||
【主权项】：
一种同时检测柑桔4种重要病原的一步法多重PCR检测方法，4种重要嫁接传播病原包括柑桔衰退病毒，柑桔裂皮病类病毒，柑桔碎叶病毒，柑桔黄龙病菌，其特征在于：提取柑桔样品总核酸，选用4种病原的特异引物，对待测样品进行(RT)‑PCR扩增，同时设计了泛素基因引物序列，体系中设置了泛素基因作为内参基因，最后电泳鉴定：1)根据泛素基因保守序列区域设计特异引物UBQ‑F：GATCTTCGCCTTAACGTTGTCAAT，UBQ‑R：GTTGATTTTTGCTGGGAAGCA，作为内参基因，2)所述(RT)‑PCR扩增所需试剂如下：柑桔衰退病毒引物：0.13μmol/L，柑桔裂皮病类病毒引物：0.5μmol/L，柑桔碎叶病毒引物：0.16μmol/L，黄龙病病菌引物：0.4μmol/L，内参泛素基因引物：0.24μmol/L，Mg2+为2.7mmol/L，dNTP为0.5mmol/L，6mM DTT，RT/Taq酶，2×RT‑PCR Buffer，灭菌去离子水。(RT)‑PCR扩增条件为：55℃，30min；94℃，5min；94℃，30s；68℃，80s；35个循环；68℃，7min。
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