[发明专利]抗痘苗病毒IgY抗体的制备

摘要

本发明公开了一种抗痘苗病毒(Vaccina virus，VACA)卵黄抗体的制备及运用该抗体-磁珠耦连物对痘苗病毒进行富集的方法，可用于痘苗病毒的检测及感染治疗，属于生物技术领域。抗VACA卵黄抗体是将灭活的痘苗病毒作为抗原免疫产蛋鸡，通过PEG-6000沉淀法从卵黄中获得的抗体，用于制备VACA感染的预防药物，及将其耦连磁珠对VACA进行富集的诊断试剂。实验证明特异性抗VACA卵黄抗体具有特异性结合相应VACA抗原的能力，可阻止VACA感染；耦连磁珠的卵黄抗体可以对VACA病毒进行富集，可以作为VACA诊断工具。

主权项

一种抗痘苗病毒VACA(Vaccinia virus，VACA)卵黄抗体IgY的制备，其特征在于：所述抗VACA卵黄抗体经斑点免疫吸附实验(Dot ImmunobindingAssay，DIBA)证明可以和VACA抗原发生特异性结合反应；免疫电镜(immunoelectron microscopy，IEM)观察，金标抗VACA卵黄抗体可以特异性结合VACA病毒粒子表面；免疫印记(western blot，WB)分析，卵黄抗体在100KDa处可特异性结合痘苗病毒，呈现特异性染色；间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence，IFA)测定滴度，卵黄抗体在第3次加强免疫后，及第21周达到最高；50％斑点中和试验(plaque reduction neutralization test，PRNT50)表明，第二次加强免疫后，中和抗体滴度达到最大；抗体滴度达到最高时，将IgY结合到磁珠，浓缩不同稀释倍数的痘苗病毒，浓缩的病毒量使用实时荧光PCR检测其含量，当病毒含量达到5PFU/ml时，其回收率达到35.4％。