[发明专利]中国鲎素组成型酵母表达载体及其制备方法

摘要

一种中国鲎素组成型酵母表达载体及其制备方法，属于生物技术领域。本发明的目的是采用微生态理论和分子生物学技术，将中国鲎抗菌肽TachyplesinsI（TPI）基因克隆到组成型表达载体pGAPZαA中，构建鲎素抗菌肽基因GAP启动子酵母表达载体。本发明首先根据tachyplesins基因的测序结果设计引物TPI-NNX1和TPI-NNX2，然后根据pGAPZα使用手册合成通用引物，对TPI基因的克隆质粒pMD-18T-TPI和酵母表达载体pGAPZαA进行双酶切，回收酶切目的片段，用T4DNA连接酶连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性转化子，提取质粒，进行PCR和双酶切鉴定，并进行测序。本发明筛选能够高效表达、零污染的鲎素抗菌肽酵母高效表达基因工程菌。

主权项

一种中国鲎素组成型酵母表达载体的制备方法，其特征在于：根据tachyplesins基因的测序结果设计引物TP I‑NNX1和TP I‑NNX2，含如下酶切位点：上游引物TP I‑NNX1：5’‑CCGC|TCGAGAAAAGAAAATGGTGCTTCCGTGTTTG‑3’Xho I下游引物TP I‑NCX2：5’‑GCT|CTAGATTAACGGCAACGACGGTAGCAG‑3’Xba I根据pGAPZα使用手册合成通用引物：上游引物5’ pGAP：5’‑GACTGGTTCCAATTGACAAGC‑3’下游引物3’AOX1：5’‑GCAAATGGCATTCTGACATCC‑3’对TP I基因的克隆质粒pMD‑18T‑TP I和酵母表达载体pGAPZα A进行双酶切，回收酶切目的片段，用T4 DNA连接酶连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性转化子，提取质粒，进行PCR和双酶切鉴定，并进行测序。