[发明专利]一种对牛前体脂肪细胞进行体外培养的方法

摘要

一种对牛前体脂肪细胞进行体外培养的方法，属于细胞与组织工程技术领域。本发明基于传统消化培养方法，利用组织匀浆机结合胶原酶I培养基处理脂肪组织，采用含胎牛血清的DMEM/F12培养液对牛前体脂肪细胞进行体外培养，成功建立了牛前体脂肪细胞体外培养的新模型。本发明工艺先进简单、培养基配制科学合理，节省了人力和物力，极大的缩短了试验样品处理的时间，且获得细胞形态最好，培养及提取RNA效率最高，是一种更为便捷、长期高效的前体脂肪细胞培养方法，为后续深入研究前体脂肪细胞增殖分化过程中基因、蛋白的表达及信号通路奠定基础，且为调控肉牛体脂沉积、预防奶牛围产期和泌乳高峰期疾病等提供新思路和新方法。

主权项

一种对牛前体脂肪细胞进行体外培养的方法，其特征是，a 无菌条件下取牛皮下脂肪组织，将其移入预先盛有D‑Hanks液的平皿，漂洗5～8次，用眼科剪去除脂肪组织中可见的血管和结缔组织；b 然后剪切组织块至8～10mm3小块，用组织匀浆机180～200r/min匀浆至乳糜状；继而加入0.1％胶原酶I培养基消化30min，其间每5min振荡1次；c 经200目不锈钢细胞筛过滤去除未消化组织块及大体积的脂肪细胞，将细胞悬液移入离心管，2000r/min离心5min；弃去离心后的上清液，加入细胞培养液清洗1次，2000r/min离心10min，制成细胞悬液，显微镜下计数，以5×104cells/mL接种细胞至培养皿或培养瓶，置入37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中培养；其中，步骤b中0.1％胶原酶I培养基为：将100mg胶原酶I溶解于100毫升D‑Hanks液中，用5.6％NaHCO3溶液调节PH值至7.2～7.4，经0.22微米过滤器过滤、分装，‑20℃保存备用；步骤c中细胞培养液为：在DMEM/F12液中添加其体积10％的胎牛血清，经0.22微米过滤器过滤、分装，4℃保存备用。