[发明专利]烟粉虱中甘薯褪绿矮化病毒的检测方法及其应用

摘要

本发明涉及一种烟粉虱中甘薯褪绿矮化病毒的半巢式RT-PCR检测方法，包括设计合成SPCSV病毒的3条引物CSV70P1、CSV70P2、CSV70P3；用解剖针挑取烟粉虱，放入加有预冷RNA提取液的离心管中，提取烟粉虱的总RNA作为PCR模板，进行反转录；以反转录产物作为模板，利用引物CSV70P1和CSV70P2进行半巢式RT-PCR的第一轮扩增，预期扩增片段大小为431bp；利用引物CSV70P1和CSV70P3进行半巢式RT-PCR的第二轮扩增，预期扩增片段大小为170bp；用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。本发明方法能对单头或多头带毒的烟粉虱进行检测，阳性率为100%，能稳定地检测出单头或多头烟粉虱中的SPCSV，检测效率较高；检测出SPCSV时的cRNA最低浓度为5.69×101拷贝/µL，灵敏性较高。该方法能实现对烟粉虱带毒情况的有效监测，对加强烟粉虱的防治和病毒的蔓延扩散具有重要意义。

主权项

一种烟粉虱中甘薯褪绿矮化病毒SPCSV的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）分别设计合成SPCSV 病毒的3条引物：CSV70P1: 5′‑GACGGKGGTACKATGAARGTCC‑3′，CSV70P2: 5′‑GGCTCACAAACHGAYTTCATAAACAT‑3′，CSV70P3: 5′‑TCAACCCCAACCCATCGTTTTAG‑3′，其中K为 G 或 T，R为 A 或 G，Y为C或 T，H为A、T或C；（2）用解剖针挑取烟粉虱，放入加有预冷RNA提取液的离心管中，提取烟粉虱的总RNA作为PCR模板，进行反转录；（3）以反转录产物作为模板，利用引物CSV70P1和CSV70P2进行半巢式RT‑PCR的第一轮扩增，预期扩增片段大小为431bp；利用引物CSV70P1和CSV70P3进行半巢式RT‑PCR的第二轮扩增，预期扩增片段大小为170bp；（4）用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。