[发明专利]立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法无效
申请号: | 201210109290.4 | 申请日: | 2012-04-13 |
公开(公告)号: | CN102660631A | 公开(公告)日: | 2012-09-12 |
发明(设计)人: | 郑裕国;薛亚平;王威;沈寅初 | 申请(专利权)人: | 浙江工业大学 |
主分类号: | C12Q1/32 | 分类号: | C12Q1/32 |
代理公司: | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人: | 黄美娟;冷红梅 |
地址: | 310014 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: |
本发明提供了一种立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法。所述方法包括:(1)取待测含α-羟酸脱氢酶的样品溶于pH 6~9的缓冲液中,添加结构如式(I)所示的α-羟酸手性单体作为底物,于20~50℃水浴中进行转化反应;(2)转化反应结束后,取转化液添加FeCl3显色剂溶液进行显色反应5~30min,反应结束后,根据反应液呈现的颜色判断结果;本发明方法不需要对拟筛选的底物进行衍生化,能够利用简单的比色法快速鉴定所筛选的微生物的脱氢酶活性及光学选择性,具有筛选流程简单、速度快、设备要求低、通用性强等优点,为以外消旋的扁桃酸及其相关衍生物为底物来进行生物酶法拆分获得光学纯的产品带来了极大的便利。 |
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搜索关键词: | 立体 选择性 脱氢酶 筛选 方法 | ||
【主权项】:
1.一种立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法,所述方法包括:(1)取待测含α-羟酸脱氢酶的样品溶于pH 6~9的缓冲液中,添加结构如式(I)所示的α-羟酸手性单体作为底物至底物终浓度为1~100mM,于20~50℃水浴中进行转化反应;
式(I)中,(R)m表示m个R取代基,R为H、羟基或卤素,m为1或2;(2)转化反应结束后,取转化液添加FeCl3显色剂溶液进行显色反应5~30min,转化液与FeCl3显色剂溶液体积之比为1∶10~30;反应结束后,若呈现颜色均一的蓝绿色,则表明待测样品中含有与步骤(1)底物的立体构型一致的α-羟酸脱氢酶或含有的α-羟酸脱氢酶没有立体选择性;若现淡黄色,表明待测样品中含有与底物的立体构型相反的α-羟酸脱氢酶;所述FeCl3显色剂溶液组成如下:FeCl3·6H2O 1~2mmol/L,二甲基亚砜200~500ml/L,冰醋酸10~30ml/L,溶剂为水。
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