[发明专利]对目标DNA序列进行特异性信号放大和检测的方法

摘要

本发明公开了一种对待测体系中的DNA目标序列进行特异性信号放大和检测的方法，利用单脱碱基双标记荧光探针的区分作用，结合内切酶IV和Lamdba外切酶的选择性切割作用，在温和条件下高灵敏度、高选择性、快速地检测DNA目标序列。本发明方法能够区分目标序列与单碱基差异干扰序列，适合应用于SNP分型以及低丰度突变的检测。

主权项

一种对待测体系中的DNA目标序列进行特异性信号放大和检测的方法，所述待测体系中不存在与目标序列仅有一个碱基差异的干扰序列，该方法包括如下步骤：1)制备单脱碱基双标记荧光探针，该探针为5’‑OH末端的单链DNA，其脱碱基位置位于探针5’末端下游第3‑6位核苷酸残基处；荧光基团和猝灭基团中的一个标记在脱碱基位置下游六个核苷酸残基以内，另一个标记在上一个基团的下游，二者之间相隔三个核苷酸残基以上；除脱碱基位置外，该探针与DNA目标序列完全匹配互补，或者仅在脱碱基位置3’下游第一个碱基位置与目标序列错配；2)将步骤1)制备的探针与待测体系混合，然后加入内切酶IV和Lamdba外切酶，在37℃进行实时荧光测定：所述探针与待测体系中的目标序列特异性结合，经内切酶IV和Lamdba外切酶切割后发出荧光，释放出的目标序列继续与另一个探针特异性结合，重复上述过程，从而实现对目标序列的信号放大和检测。