[发明专利]一种Hib多糖与蛋白结合工艺的优化方法

摘要

本发明公开了一种Hib多糖与蛋白结合工艺的优化方法，它包括多糖衍化、多糖-TT（破伤风类毒素蛋白）结合物制备两个步骤。本发明提供一种多糖与载体蛋白结合的新的桥连物，在原来的方法上，通过改变桥连分子，使结合反应更有效地进行，继而提高多糖与载体蛋白的结合率，缩短结合反应时间，并使结合反应的合格结合物收率得到一定程度提高，结合反应重复性很高，有利于大规模生产，降低了生产成本。

主权项

一种Hib多糖与蛋白结合工艺的优化方法，其特征在于：它包括以下多糖衍化、多糖‑TT结合物制备两个步骤，其中，所述的多糖衍化包括以下子步骤：S11：在Hib荚膜多糖中加入注射用水，稀释成终浓度为1～2 mg／ml的溶液；S12：加入0.1～0.4倍于多糖质量的CNBr，进行活化处理；S13：活化完成后，加入3～5倍于多糖质量的SDH，进行偶联反应；S14：将偶联反应所得的反应物分装于透析袋内，并置于0.02～0.08mol／L的NaCl溶液中透析2～3次，每次透析8～12小时，去除残余氰化物，然后超滤浓缩至原体积，得到多糖‑SDH衍生物；所述的多糖‑TT结合物制备包括以下子步骤：S21：在多糖‑SDH 衍生物溶液中加入等体积的浓度为1～2mg／ml的TT溶液，混均匀后置于冰浴中25～35分钟，水浴温度控制为2～8℃；S22：冰浴完成后，加入EDAC粉末至终浓度为15～25mmol／L，保持pH为4.5～4.9，于2～8℃的温度条件下反应1.5～2.5h，得到中间反应物；S23：将中间反应物经Sepharose 4FF凝胶柱分离纯化，收集KD值小于0.3的洗脱液，并将收集到的洗脱液进行除菌过滤，得到多糖‑TT结合物，并置于2～8℃下保存。