[发明专利]一种高效分离柳枝稷叶片原生质体的方法

摘要

本发明一种高效分离柳枝稷叶片原生质体的方法，属于悬浮细胞系技术领域。选取不同时期柳枝稷叶片为材料，步骤主要包括首先用75%酒精将叶片表面擦拭干净，将叶片剪成5mm左右细丝，放入烧杯中，在预质壁分离液中避光静置处理1小时。之后加入酶液，低速酶解2小时，之后静置12小时。将分离后的液体分装入1.5ml离心管中，800rpm离心10min，弃上清，用缓冲液洗涤，如此重复3次。所得下层沉淀即为游离出的体细胞原生质体。本发明具有方法简单、易于操作，对设备和培养条件的要求较低等优点。

主权项

一种高效分离柳枝稷叶片原生质体的方法，其特征在于按照下述步骤进行：柳枝稷叶片的处理：采集一月或半年的不同时期柳枝稷叶片，用体积分数为70%~80%酒精将叶片表面擦拭干净后，用蒸馏水冲洗干净，晾干;用干净的刀片将柳枝稷叶片上表皮轻轻刮去，将其剪成0.5 mm的细丝，放入烧杯中；酶解：首先将上述处理过柳枝稷叶片的在预质壁分离液中避光静置处理1~1.5h，用移液枪将液体吸出，用质壁分离缓冲液将叶片清洗三次；用10~15ml酶液将叶片没过，避光条件下，置于28℃摇床，转速20 r/min，酶解2~2.5h；之后在避光条件下，静置12~14h；过滤：酶解后，依次用40目、100目滤网过滤溶液，之后将滤液分装入1.5 ml离心管中;离心清洗800 rpm离心8~10 min，弃上清;用质壁分离缓冲液清洗3遍;收集沉淀，即为原生质体。