[发明专利]一种microRNA定量检测方法有效
| 申请号： | 201210153449.2 | 申请日： | 2012-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN102676677A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 李启靖 | 申请（专利权）人： | 北京旷博生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区亦庄*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种microRNA定量检测方法，包括如下步骤：（1）提取样本的总RNA；（2）用polyA聚合酶处理总RNA，使miRNA的3’端加上一段polyA尾巴；（3）用5’端含有接头序列的oligo(dT)反转录引物进行反转录，使得到的第一链cDNA加上一段接头；（4）使用待测miRNA序列特异性正向引物和与所述接头序列互补的通用反向引物进行定量实时PCR扩增，其中，所述通用反向引物是长度不同的两种反向引物的混合物。本发明的方法可以对miRNA的表达进行定量检测和分析，大大提高了现有检测方法的特异性、灵敏性和重复性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 microrna 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种miRNA定量检测方法，包括如下步骤：（1）提取样本的总RNA；（2）用polyA聚合酶处理总RNA，使miRNA的3’端加上一段polyA尾巴；（3）用5’端含有接头序列的oligo(dT)反转录引物进行反转录，使得到的第一链cDNA加上一段接头；（4）使用待测miRNA序列特异性正向引物和与所述接头序列互补的通用反向引物进行定量实时PCR扩增；其中，所述通用反向引物是长度不同的两种反向引物的混合物；长反向引物由3’部分和5’部分组成，其中，3’部分与步骤（3）中反转录得到的第一链cDNA的接头5’端的部分序列互补，5’部分不与所述第一链cDNA的接头互补；短反向引物是长反向引物的片段，其缺少长反向引物3’端的部分序列。
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