[发明专利]一种人角膜基质细胞系的构建方法

摘要

一种人角膜基质细胞系的构建方法，具体涉及一种利用海水鱼类胶原蛋白制备组织工程人角膜基质载体支架的方法，是采用非酶解鳕鱼皮胶原蛋白冻干粉充分溶解于盐酸中，离心去除沉淀后将上清液分装入培养板孔中冻干，加入含硫酸软骨素的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联剂进行交联，用碱性Na2HPO4溶液稳定后，用2M NaCl、1M NaCl和蒸馏水清洗，冻干后完成制备。本发明工艺科学合理，所制备的载体支架可用于批量生产，满足组织工程人工角膜基质规模化重建对载体支架的大量需求，为人角膜基质病盲通过临床角膜移植和重见光明创造条件，且此载体支架制备以及应用于组织工程人工角膜基质体外重建和临床治疗的成本低。

主权项

一种人角膜基质细胞系的构建方法，其特征在于所述的构建方法是先将角膜取出后用庆大霉素消毒，再撕除带有后弹力层的角膜内皮和带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的角膜基质组织块后进行消化处理，将角膜基质组织块按近后弹力层面向下平贴于培养孔的底部，然后先加入无血清培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，后将培养液更换为人角膜基质细胞专用培养液，细胞长成单层后用胰酶消化法进行继代培养，培养至第60代完成了人角膜基质细胞系的构建；其中，人角膜基质细胞专用培养液为含有20%胎牛血清、0.4‰~1.0‰羧甲基壳寡糖和0.01‰~0.02‰人碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养液。