[发明专利]共转orca3/g10h基因提高长春花中长春花类生物碱含量的方法有效
| 申请号： | 201210166532.3 | 申请日： | 2012-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN102703501A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 唐克轩;赵静雅;王名雪;潘琪芳;徐菲 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/00 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭国中 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种共转orca3/g10h基因提高长春花中长春花类生物碱含量的方法，所述方法包括如下步骤：克隆orca3基因和g10h基因；分别构建orca3基因和g10h基因的表达盒，然后依次将表达盒置于双元表达载体pCAMBIA2300中，构建含orca3和g10h基因的植物双元表达载体；通过冻融法转化根癌农杆菌获得工程菌；通过农杆菌介导法转化长春花并再生出植株；PCR检测基因orca3/g10h的整合情况测定转基因长春花中长春花类生物碱的含量，筛选获得生物碱类含量提高的转基因长春花植株。本发明提供了一种高产、稳定的长春花生物碱药源，有利于大规模、低成本生产长春花类生物碱。 | ||
| 搜索关键词： | orca3 g10h 基因 提高 长春花 生物碱 含量 方法 | ||
【主权项】：
一种共转orca3/g10h基因提高长春花中长春花类生物碱含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）采用基因克隆方法获得orca3和g10h基因；（2）分别构建CaMV 35S‑orca3‑nos terminator和CaMV 35S‑g10h‑nos terminator的表达盒，然后依次将所述表达盒置于双元表达载体pCAMBIA2300中，构建成含orca3和g10h基因的植物双元表达载体pCAMBIA2300+g10h+orca3；（3）将所述植物双元表达载体pCAMBIA2300+g10h+orca3通过冻融法转化根癌农杆菌，获得含pCAMBIA2300+g10h+orca3的根癌农杆菌工程菌；（4）将所述工程菌转化长春花并再生出植株。
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