[发明专利]一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法有效
| 申请号： | 201210168346.3 | 申请日： | 2012-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN103451218A | 公开（公告）日： | 2013-12-18 |
| 发明（设计）人： | 卢小玲;赵永祥;王旋;姜晓兵 | 申请（专利权）人： | 卢小玲;赵永祥 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K19/00;A61K49/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217 | 代理人： | 周娇娇 |
| 地址： | 530021 广西壮族自治区*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新型细胞因子融合蛋白——趋化因子干扰素诱导蛋白10单链抗体的制备方法，包括以下步骤：S1、合成人源性IP10胞外端基因；S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III（EGFRvIII）的单链抗体；S3、对(Gly4Ser)3柔性接头进行优化合成；S4、将IP10和抗EGFRvIII单链抗体依次克隆于真核表达载体中，并通过优化的(Gly4Ser)3柔性接头连接，获得IP10-scFv基因；S5、将该基因在大肠杆菌中高效表达，获得生物学活性的IP10-scFv。本发明的IP10-scFv具有更高的抗原-抗体结合率，临床上可以减少IP10用量，降低其毒副作用，进而还可以减少胶质瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）过继输入的数量和提高CTL活性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 新型 细胞因子 融合 蛋白 ip10 抗体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：S1、根据基因库合成人源性IP10胞外端编码基因；S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体，并测定其基因序列；S3、对(Gly4Ser)3柔性接头进行胸腺嘧啶‑腺嘌呤序列替换部分鸟嘌呤‑胞嘧啶序列的优化合成，并克隆于真核表达载体中；S4、将所述IP10胞外端编码基因和抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体基因依次克隆于所述真核表达载体中，并通过所述优化合成的(Gly4Ser)3柔性接头相连接，获得IP10单链抗体的编码基因；S5、将所述IP10单链抗体的编码基因在大肠杆菌中表达，获得IP10单链抗体。
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