[发明专利]一种抑制人类免疫缺陷病毒的真菌提取物的制备方法

摘要

一种抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的真菌提取物的制备方法，所依赖的菌株是炭团菌属真菌Q-s-4(Hypoxylon sp.)。真菌Q-s-4经液体发酵培养，制备发酵产物的提取物。该方法可用于真菌Q-s-4的大规模工业化培养，并以发酵产物为原料，工业化生产发酵产物的提取物。利用该方法制备的提取物，具有显著抑制HIV-1整合酶的活性，并有抗菌活性，在治疗艾滋病和细菌感染的新药研发方面具有重要价值。

主权项

一种制备保藏编号为CGMCC No.6039的炭团菌属真菌Q‑s‑4(Hypoxylon sp.)的发酵产物提取物的方法，包括步骤：(1)真菌的发酵培养将真菌Q‑s‑4自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于含PDA培养基的平皿中，于25℃恒温培养5‑12天，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基中进行发酵培养；液体培养基组成按重量百分含量计算为：麦麸1‑5％，煮20‑30分钟，取汁，葡萄糖1‑4％，KH2PO40.1‑0.4％，MgSO40.1‑0.3％，pH自然；三角瓶或其他容器装液体培养基，装量为容器体积的30‑60％；灭菌后接入真菌Q‑s‑4，22‑26℃振荡暗培养12‑30天，振荡转速90‑130转/分钟；(2)真菌发酵产物的获得真菌Q‑s‑4经发酵培养后，用80‑100目尼龙网过滤，分离菌丝体和发酵液；菌丝体用水冲洗干净，挤压除去大部分水分；发酵液40‑60℃减压浓缩至原发酵液体积的10‑20％；(3)真菌发酵产物提取物的制备①菌丝体用甲醇或95％乙醇超声提取2‑3次，每次40‑60分钟，每次提取用的溶剂体积为菌丝体重量的8‑12倍；或菌丝体用甲醇、95％乙醇或丙酮渗漉提取，提取用的溶剂体积为菌丝体重量的12‑15倍；所得提取液于40‑60℃减压浓缩后干燥，得到菌丝体总提取物；②发酵液浓缩物加入95％乙醇或无水乙醇进行醇沉，所用溶剂体积为发酵液浓缩物体积的3‑5.5倍，放置24h分层，收集上清液，于40‑60℃减压浓缩后干燥，得到发酵液总提取物；③上述两种总提取物，分别分散于水中，依次以石油醚和乙酸乙酯萃取至溶剂层无色；合并各萃取液，于40‑60℃减压浓缩后冷冻干燥，得到各总提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位。