[发明专利]基于聚酰胺胺树状大分子载体的基因转染方法

摘要

本发明涉及一种基于聚酰胺胺树状大分子载体的基因转染方法，包括：（1）聚酰胺胺树状大分子表面的乳糖酸修饰，得到G5.NH2-La；（2）乳糖酸修饰的聚酰胺胺树状大分子载体与质粒复合物的制备，得到G5.NH2-La与质粒的复合物G5.NH2-La/pDNA；（3）乳糖酸修饰的聚酰胺胺树状大分子质粒复合物的靶向肝癌细胞转染及表达。本方法制备的功能化聚酰胺胺树状大分子对肝癌细胞具有靶向作用；本发明的基因转染方法具有转染条件温和，易于操作，转染效率高、特异性好等优点，应用前景广阔。

主权项

一种基于聚酰胺胺树状大分子载体的基因转染方法，包括：（1）将乳糖酸La溶于磷酸盐缓冲液中，加入1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳化二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，搅拌反应1‑5小时，得到活化好的乳糖酸溶液；将第五代聚酰胺‑胺树状大分子G5.NH2溶于蒸馏水中，得到G5.NH2溶液，然后将上述活化好的乳糖酸溶液加入G5.NH2溶液中，室温中搅拌反应1‑5天；反应结束后，将反应产物透析，最后进行冷冻干燥，得到反应产物G5.NH2‑La；（2）将步骤（1）得到的G5.NH2‑La用无菌水稀释，得到G5.NH2‑La的无菌水稀释液；用无菌水将pDNA稀释，得到pDNA的无菌水稀释液，然后将所述的G5.NH2‑La的无菌水稀释液与pDNA的无菌水稀释液混合均匀，再于37℃孵育20‑30分钟，得到G5.NH2‑La与质粒的复合物G5.NH2‑La/pDNA；（3）将HepG2细胞铺于6‑96孔培养板中，采用不含FBS的MEM培养基，于37℃、5%CO2培养20‑30小时，然后滴加入G5.NH2‑La/pDNA复合物溶液，摇匀，37℃培养2‑5小时后更换为含10%FBS的MEM培养基，继续培养20‑30小时，即可。