[发明专利]一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法

摘要

本发明所述的一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其特征在于，利用鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆出重链(VH)和轻链(VL)可变区基因，通过基因重组构建scFv及原核表达载体PET32a-AL，转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。scFv基因序列全长747碱基对，编码249个氨基酸，符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征，含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基。ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。

主权项

1.一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗，其特征在于，利用鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株克隆出重链(V_H)和轻链(V_L)可变区基因，用(Gly₄Ser)₃组成的连接肽(linker)连接V_H和V_L，构建V_H-linker-V_L形式的单链抗体scFv基因，在大肠杆菌中表达，获得鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗，基因序列全长747碱基对，编码249个氨基酸，其基因序列和氨基酸序列如下：1 cg gccgaggtgaagA  E  V  K15 ctgaaggagtctggggctgagctggtaaggcctgggacttcagtgL  K  E  S  G  A  E  L  V  R  P  G  T  S  V60 aaggtgtcctgcaaggcttctggatacgcctttactaattacttgK  V  S  C  K  A  S  G  Y  A  F  T  N  Y  L------------CDRH1-----105 atagagtgggtaaagcagaggcctggacagggccttgagtggattI  E  W  V  K  Q  R  P  G  Q  G  L  E  W  I----150 ggagtgattaatcctggaagtggtggtactaactacaatgagaagG  V  I  N  P  G  S  G  G  T  N  Y  N  E  K----------------------CDH2---------------195 ttcaagggcaaggcaacactgactgcagacaaatcctccagcactF  K  G  K  A  T  L  T  A  D  K  S  S  S  T-------240 gcctacatgcagctcagcagcctgacatctgatgactctgcggtcA  Y  M  Q  L  S  S  L  T  S  D  D  S  A  V285 tatttctgtgcaagagggcggttcccccattactatgctatggacY  F  C  A  R  G  R  F  P  H  Y  Y  A  M  D---------------CDRH3----------330 tactggggtcaaggaacctcagtcaccgtgtcgtcgggtggaggcY  W  G  Q  G  T  S  V  T  V  S  S  G  G--375 ggcggcggctccggtggtggtggatccggtggtggtggttct gacD420 atccagatgacacagactccactctccctgcctgtcagtcttggaI  Q M T Q T P L S L P V S L G465 gatcaagcctccatctcttgcggatctagtcagagccttgtacacD Q A S  I  S  C G S S Q S L V H---------------CDRL1----510 agtaatggaaacacctatttacattggtacctgcagaagccaggcS  N G N T Y L H W Y L Q  K P G----------------------555 cagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttctQ S P K L L  I  Y K V S N R F S---------CDRL2-------600 ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcG V P D  R  F  S  G  S  G  S  G T D  F645 acactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttatT L K I  S  R V E A  E D L  G V Y690 ttctgctctcaaagtacacatgttccgctcacgttcggtgctgggF  C S Q S T H V P L T  F G A G---------CDRL3-----------730 accaagctggagctgaaacgt750T K L  E L  K R其中，划线部分是互补决定区(CDR1、CDR2、CDR3)，斜体是特征性的半胱氨酸，方框内为连接肽序列。